文献类型： 中文期刊
作者： 张秀婷 1 ; 吴香菊 1 ; 齐静 1 ; 丛晓燕 1 ; 李均同 1 ; 陈大全 1 ; 姜宁朋 1 ; 杜以军 1 ;
作者机构： 1.烟台大学药学院;山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室;山东省科技服务发展推进中心
关键词： 猪TRIM56基因;基因敲除;PAM-KNU细胞;猪繁殖与呼吸综合征病毒
期刊名称： 畜牧与兽医
ISSN： 0529-5130
年卷期： 2023 年 55 卷 011 期
页码： 117-123
收录情况： 北大核心
摘要： 利用CRISPR/Cas9 基因编辑技术构建 1 株猪TRIM56 基因敲除的PAM-KNU细胞系,并探究其在增殖猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)疫苗毒株中的应用.根据猪TRIM56 基因组外显子区域设计合成2 对特定的向导RNA引物,将引物磷酸化、退火并连接至Px459M和EZ-Guide-XH载体构建敲除质粒Px459M-sTRIM56-KO;将敲除质粒转染PAM-KNU细胞,经嘌呤霉素筛选、有限稀释法筛选获得单克隆细胞并扩大培养;通过RT-PCR、测序及Western blot筛选鉴定,最终获得了敲除细胞系sTRIM56-KO-PAM-KNU;将PRRSV R98 疫苗株感染野生型细胞及敲除细胞系,利用real-time RT-PCR、半数组织培养感染量(TCID50)以及Western blot 检测PRRSV增殖情况.结果显示,TRIM56 敲除细胞系构建成功,该敲除细胞系中sTRIM56 基因编码区第 929~2120 位 1192 个碱基缺失,未检测到sTRIM56 蛋白条带;敲除细胞系中PRRSV R98 疫苗株病毒拷贝数、病毒滴度以及N蛋白表达均显著高于对照组.本研究为猪TRIM56 抗病毒机制研究及PRRSV疫苗研发奠定了基础.
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