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FMDV3D基因真核表达质粒的构建、表达及对Ⅰ型IFN信号通路的作用

文献类型： 中文期刊

作者： 苗勤 1 ; 吴香菊 1 ; 齐静 1 ; 丛晓燕 1 ; 李均同 1 ; 王林 1 ; 杜以军 1 ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院;山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室;农业农村部畜禽生物组学重点实验室

关键词： 口蹄疫病毒;3D蛋白;真核表达;Ⅰ型IFN信号通路

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2024 年 56 卷 002 期

页码： 144-150

收录情况： 北大核心

摘要： 本研究旨在构建口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)3D基因真核表达质粒,并探究其对Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)信号通路的作用.根据GenBank序列合成 3D基因并将其插入真核表达载体pXJ41 构建真核表达质粒pXJ41-Myc-3D,经PCR、双酶切及测序鉴定正确后分别转染HEK-293T细胞和PK-15 细胞,Western blotting及间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)检测 3D蛋白在细胞内的表达及定位.通过双荧光素酶报告基因(Luciferase)、Real-time PCR、TCID50 等试验检测HEK-293T细胞中过表达 3D蛋白对水疱性口炎病毒(Versicular stomatitis virus,VSV)诱导的Ⅰ型IFN信号通路的影响.结果显示,真核表达质粒pXJ41-Myc-3D构建成功;3D蛋白在HEK-293T细胞中表达,大小约为55 kDa,主要定位在细胞核中;3D蛋白抑制了VSV诱导的IFN-β启动子活性和IFN-β mRNA水平,促进了VSV的复制.本研究为深入探究 3D蛋白抑制Ⅰ型IFN信号通路的作用机制奠定了基础.

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