科研产出
大白菜PAT1基因的克隆及其表达载体的构建
《山东农业科学 》 2009
摘要：根据GenBank中大白菜(Brassica campestris L. ssp. pekinensis)基因组测序结果,分析了大白菜PAT1(phytochrome A signal transduction)基因的内含子和外显子。通过拼接外显子,获得了大白菜PAT1基因的cDNA编码序列。根据编码区序列,设计并合成了一对引物;利用这对引物,采用RT-PCR技术扩增出大白菜福山包头PAT1基因(CcPAT1)的全长cDNA序列。CcPAT1编码区共1 500 bp,与拟南芥PAT1相似性为85.03%。同时构建了含有35S启动子的pCAMBIA-2300-CcPAT1过表达载体,并利用PAT1 5′端特异区域构建了pFGC-1008-PAT1RNAi(RNA interference)载体,以备将来研究大白菜CcPAT1基因的功能。
关键词： 大白菜 PAT1基因 cDNA克隆 表达载体 RNAi
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大白菜风味物质的气相色谱-质谱分析
《食品科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用顶空固相微萃取和气相色谱-质谱联用分析技术,对12个大白菜试材进行连续2年的风味物质成分分析。共检测鉴定出了腈类、酯类、醛类、酮类、醇类、烃类及杂环类等14类170多种化合物。主要的风味物质有45种,初步认为2-环己烯-1-醇、2-己烯醛、3-己烯-1-醇、苯丙腈和苯乙基异硫氰酸酯等5种成分为大白菜的特征性风味物质。
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大白菜BrARGOS基因的分离与功能分析
《中国农业科学 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：【目的】从大白菜自交系日喀则的叶片中分离新的拟南芥ARGOS的同源基因,进行氨基酸序列比对和该基因的表达模式分析,转化拟南芥分析其功能,并分析该基因的表达量与大白菜叶杂种优势之间的关系。为在大白菜中研究该基因的功能提供依据。【方法】利用RT-PCR从大白菜叶中分离出ARGOS同源基因的cDNA序列,采用DNAMAN软件分析该基因所编码的蛋白质的二级结构,通过半定量RT-PCR检测该基因在大白菜各器官中的表达水平,分析转基因拟南芥的表型鉴定该基因的功能,通过半定量RT-PCR分析该基因的表达量与大白菜叶的杂种优势之间的关系。【结果】根据拟南芥ARGOS序列,通过Blast检索到大白菜BAC库中的序列,根据该序列设计特异引物,以提取自日喀则叶片的RNA反转录产物为模板,通过PCR扩增出1个新的ARGOS的同源基因BrARGOS。对大白菜、拟南芥和番茄中3个基因所编码的蛋白质做序列比对分析发现,这3个蛋白质的C末端富含亮氨酸。BrARGOS蛋白的二级结构含有自由卷曲、伸展片段和α-螺旋。通过半定量RT-PCR分析,在大白菜各器官中均检测到BrARGOS基因的表达,在果荚中表达量最高,其次为子叶,茎生叶中表达量最低。通过PCR检测阳性转化体拟南芥基因组显示,NPTⅡ基因已经转入拟南芥基因组中,表明外源BrARGOS基因也同时转入拟南芥基因组中。与转空载体对照拟南芥相比,过量表达BrARGOS基因的转基因拟南芥的叶、花、叶鲜重和株高均显著增大/高。【结论】从大白菜自交系日喀则叶片中分离了1个新的ARGOS的同源基因BrARGOS,并分析了BrARGOS基因的表达模式和功能。在拟南芥中过量表达BrARGOS基因使拟南芥的地上器官显著增大。大白菜BrARGOS基因可能与调节植物器官大小有关。
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大白菜CBF4基因的克隆和遗传进化分析
《山东农业科学 》 2009
摘要：采用RT-PCR法,从大白菜(Brassica rapasubsp.pekinensis)河头早中克隆了拟南芥CBF4的同源基因BrCBF4,并对它的序列特征、蛋白结构和遗传进化进行了分析。结果表明,BrCBF4全长663 bp,编码一个包含220个氨基酸残基和具有典型AP2结构域的蛋白,并且含有两个潜在的豆蔻酰化位点。遗传进化分析表明,BrCBF4与BjDREB1-2的关系最近,与拟南芥AtCBF4同属一个类群,而AtCBF1,2,3与大白菜的BrCBF1,2,3及其它芸薹属植物相关基因分属另一个类群。推测BrCBF4与BjDREB1-2、AtCBF4为直系同源基因,在功能上相似,而与BrCBF1,2,3存在功能上的分化。本研究为进一步研究BrCBF4在大白菜非生物逆境响应中的功能奠定了基础。
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大白菜LEAFY新基因BrLFY1的生物信息学解析
《山东农业科学 》 2009
摘要：利用比较基因组学的方法从大白菜基因组序列中鉴定出一个新的LEAFY基因BrLFY1,并对它的序列特征、遗传进化和顺式元件进行了分析。结果表明,BrLFY1含有两个内含子,预测编码区为1260 bp,编码一个分子量为46.38 ku的蛋白。在进化上,BrLFY1与萝卜的RsLFY1关系最近,二者预测编码蛋白的序列一致性高达94.79%。另外,在BrLFY1的上游序列中存在多个激素和逆境应答元件。这说明大白菜LEAFY基因BrLFY1的表达可能不仅受多种激素的调节,还受多种逆境因子的影响。本研究为进一步研究BrLFY1在大白菜开花和逆境响应中的功能奠定了基础。
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大白菜起源与演化研究的进展
《中国果菜 》 2009
摘要：本文综述了关于大白菜起源与演化的各种假说,及近年来利用生物技术对各种假说的验证及推测。大白菜与白菜有一定关系已经为多数学者认同,并且认为大白菜的起源稍晚于白菜,大白菜低级的散叶类型是逐级进化到结球类型的。
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大白菜RAPD反应条件的优化
《山东农业科学 》 2008
摘要：RAPD是作物主要农艺性状分子标记及遗传多样性研究的一项重要技术。为了适应大白菜反应体系,本试验以大白菜品种413、96及其F1为试材,对影响RAPD扩增的模板DNA用量、Mg2+浓度、TaqDNA聚合酶浓度、dNTPs浓度、引物浓度等因素进行了优化,结果如下:20μl PCR反应体系,30 ng(1.5μl)DNA模板,3 mmol/L Mg2+,0.01 U/μl Taq DNA聚合酶,0.4 mmol/L dNTPs,0.8μmol/L引物为最佳反应浓度。
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