科研产出
大白菜抗软腐病基因BrWRKY33植物表达载体的构建
《基因组学与应用生物学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体。本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-TEasy,重新构建了克隆载体T-WRKY。经测序及酶切验证,选取PCR反应中错配率最低的产物,构建了表达载体pROK2-WRKY,并将该表达载体转入到根癌农杆菌EHA105中,并对其转化子进行了鉴定。结果表明,PCR扩增获得目的基因BrWRKY33全长约1443bp,PCR及酶切结果鉴定表明克隆载体T-WRKY已经重新构建成功。表达载体的PCR及BamHⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定表明有4个重组子表现阳性,表明目的基因已经插入到pROK2表达载体,表达载体构建成功。PCR鉴定表明表达载体pROK2-WRKY已经转入根癌农杆菌EHA105中。本实验结果将为进一步研究大白菜抗软腐病基因的转化奠定基础。
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大白菜EST-SSR反应体系优化及引物筛选
《科技导报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：探讨了大白菜EST-SSR反应体系的优化,利用优化的体系筛选部分引物。采用L16(44)正交设计,研究各主要参数的适宜浓度,建立适合大白菜EST-SSR反应的最佳体系。结果表明,各因素不同水平浓度对扩增结果均有一定影响,其中以引物浓度影响最大,其次是dNTP和Taq DNA聚合酶,最小是模板DNA用量。优化后的最佳体系(20μL)为:引物浓度1.0μmol/L,dNTPs0.25mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA70ng。利用优化的体系,根据大白菜EST序列设计引物126对,分别以2对抗、感病毒病的大白菜材料的基因组DNA为模板进行扩增,筛选出至少在一份材料中扩出多态性的引物19对。该优化体系可用于大白菜EST-SSR扩增,初步筛选的引物可用于大白菜病毒病分子标记的进一步研究。
关键词： 大白菜 EST-SSR 正交设计 体系优化 引物筛选
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大白菜高效稳定遗传转化体系的建立
《山东农业科学 》 2010
摘要：以无菌苗下胚轴为外植体,建立了大白菜高效、稳定再生和遗传转化体系,获得了转基因抗性芽。结果表明,转化效率最高的基因型为Seoul,最佳筛选培养基为MS+2 mg/L6-BA+1 mg/L NAA+2 mg/LAgNO3+300 mg/L Car+10 mg/L Hyg,共培养基pH5.2,完全黑暗培养,侵染液浓度OD600=0.5,侵染时间为10 min,在此条件下转化效果最好。GUS染色结果表明,GUS基因已整合到抗性芽细胞的染色体中,能够稳定表达。
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两个大白菜FT基因的生物信息学解析
《山东农业科学 》 2010
摘要：本文利用比较基因组学的方法从大白菜的基因组中解析出两个成花素基因BrFT1和BrFT2,并对这两个基因的结构、顺式调控元件以及遗传进化进行了分析。结果表明,BrFT1和BrFT2都含有4个外显子,编码区大小均为528 bp,二者预测编码蛋白的序列一致性为90.29%,说明这两个基因序列存在某种程度的分化。进化分析表明这两个基因应为拟南芥FT和TSF基因的直系同源基因。另外,这两个基因都含有响应激素和逆境信号的顺式调控元件,而且不尽相同,说明这两个基因的表达调控有所不同,可能在功能上存在一定分化。本研究为进一步揭示大白菜FT基因在开花和逆境响应中的功能奠定了基础。
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大白菜基因工程研究进展
《安徽农业科学 》 2009 北大核心
摘要：简要综述了国内外大白菜基因工程的研究进展。主要从大白菜高频再生体系的影响因素、基因转化方法、酚类物质、农杆菌菌株、预培养和共培养等因素对大白菜遗传转化的影响进行了简要概述,总结了目前大白菜遗传转化存在的主要问题,并对今后大白菜基因工程的发展进行了展望。
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大白菜DA1基因的生物信息学解析
《山东农业科学 》 2009
摘要：运用比较基因组学的方法,首次从大白菜基因组中鉴定出一个与拟南芥中控制种子和器官大小的基因DA1同源的序列BrDA1,并对这个基因和编码蛋白的结构以及顺式反应元件进行了系统分析。结果表明,BrDA1具有LIM家族和锌指蛋白的结构特征,而且还有和泛素互作的位点,可能具有和AtDA1相似的功能。另外,本研究还发现,在大白菜和拟南芥DA1基因的启动子序列中存在多个能够响应不同激素和逆境信号的顺式反应元件。这说明,植物DA1基因不仅与种子和器官发育有关,而且与激素信号转导和逆境响应存在密切关系。本文为进一步研究DA1基因在大白菜生长发育和逆境响应中的功能以及与大白菜杂种优势的关系奠定了基础。
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