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大白菜抗软腐病基因BrWRKY33植物表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 寇洪超 1 ; 王翠花 2 ; 孙玉文 1 ; 徐文玲 2 ; 牟晋华 2 ;

作者机构： 1.安徽农业大学园艺学院

2.山东省农业科学院蔬菜研究所

关键词： 大白菜;软腐病;BrWRKY33;植物表达载体

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2010 年 29 卷 05 期

页码： 174-178

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体。本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-TEasy,重新构建了克隆载体T-WRKY。经测序及酶切验证,选取PCR反应中错配率最低的产物,构建了表达载体pROK2-WRKY,并将该表达载体转入到根癌农杆菌EHA105中,并对其转化子进行了鉴定。结果表明,PCR扩增获得目的基因BrWRKY33全长约1443bp,PCR及酶切结果鉴定表明克隆载体T-WRKY已经重新构建成功。表达载体的PCR及BamHⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定表明有4个重组子表现阳性,表明目的基因已经插入到pROK2表达载体,表达载体构建成功。PCR鉴定表明表达载体pROK2-WRKY已经转入根癌农杆菌EHA105中。本实验结果将为进一步研究大白菜抗软腐病基因的转化奠定基础。

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