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大白菜EST-SSR反应体系优化及引物筛选

文献类型： 中文期刊

作者： 佟海申 1 ; 宋琳 1 ; 张志刚 2 ; 赵智中 2 ; 宋希云 1 ; 李巧云 2 ;

作者机构： 1.青岛农业大学生命科学学院

2.山东省农业科学院蔬菜研究所

关键词： 大白菜;EST-SSR;正交设计;体系优化;引物筛选

期刊名称： 科技导报

ISSN： 1000-7857

年卷期： 2010 年 28 卷 03 期

页码： 78-83

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 探讨了大白菜EST-SSR反应体系的优化,利用优化的体系筛选部分引物。采用L16(44)正交设计,研究各主要参数的适宜浓度,建立适合大白菜EST-SSR反应的最佳体系。结果表明,各因素不同水平浓度对扩增结果均有一定影响,其中以引物浓度影响最大,其次是dNTP和Taq DNA聚合酶,最小是模板DNA用量。优化后的最佳体系(20μL)为:引物浓度1.0μmol/L,dNTPs0.25mmol/L,Taq酶0.5U,模板DNA70ng。利用优化的体系,根据大白菜EST序列设计引物126对,分别以2对抗、感病毒病的大白菜材料的基因组DNA为模板进行扩增,筛选出至少在一份材料中扩出多态性的引物19对。该优化体系可用于大白菜EST-SSR扩增,初步筛选的引物可用于大白菜病毒病分子标记的进一步研究。

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