科研产出
乳猪“高热症”猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与致病性分析
《中国预防兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT-PCR/PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离到PRRSV(XS070425毒株)。测序结果显示,XS070425毒株Nsp2基因无高致病性PRRSV Nsp2基因533～561位连续29个氨基酸"RPVTPLSEPIPVPAPRRKFQQVKRLSSAA"的缺失;但遗传进化分析显示,XS070425毒株Nsp2、ORF5基因与近期我国报道的高致病性PRRSV-HuN4和JXA1有较高的同源性,达95%～96%。致病性试验显示,PRRSV-XS070425原始病料悬液和Marc-145细胞分离物接种健康猪后,病毒血症可持续26d,并出现典型的PRRS临床症状和体温升高,但不致死感染猪。这些结果说明,无NSP2蛋白29个氨基酸残基缺失的PRRSV也是猪高热症的重要病原。
关键词： 猪高热症 猪繁殖与呼吸综合征病毒 致病性
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究
《中国农业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSVGP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 DNA免疫
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猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的诊断
《动物医学进展 》 2008 北大核心
摘要：2007年,山东4个养猪场暴发了多起母猪妊娠后流产,1月龄仔猪大量死亡为主要特征的传染病。对送检的病猪进行了病原分离、病理组织切片观察、免疫荧光检测及动物试验,结合流行病学、临床症状,确诊该养猪场混和感染了猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒,为控制猪病提供了重要的依据。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合症病毒 猪瘟病毒 混合感染 诊断
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6双基因真核表达载体在哺乳动物细胞中的表达
《山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集 》 2007 CSCD
摘要：为了实现猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的ORF5和ORF6基因在同一质粒中分别表达各自编码的蛋白,发挥E蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势,将构建成功的pIRES-ORF5/ORF6转移载体用脂质体法转入稳定表达的细胞CHO,经G418加压筛选获得稳定表达的细胞株,以RT-PCR、SDS-PAGE、Westernblot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果表明：RT-PCR检测到两种目的基因的转录；SDS-PAGE检测到同时表达的两种目的蛋白；间接免疫荧光检测到目的蛋白得到表达．Westernblot证实表达的两种蛋白具有免疫活性,为PRRS亚...
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6 CHO 蛋白的表达
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建
《山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集 》 2007 CSCD
摘要：根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRESMCSAMCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF50RF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF50RF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r。以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF50RF6基因,ORF50RF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF50RF6．经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了转移载体pIRES-ORF50RF6。测得的ORF50RF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,仍属...
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6基因 转移栽体
猪繁殖与呼吸综合征病毒山东株的分离鉴定
《莱阳农学院学报 》 2006 CSCD
摘要：在对山东省某规模化养猪场进行的繁殖障碍病血清学调查中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性猪,从中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了初步鉴定。结果表明分离毒株能在HS.2H细胞上增殖产生细胞病变,经美洲型标准株PRRSV VR-2332阳性血清进行间接免疫荧光试验结果呈阳性反应,透射电镜可观察到直径60~70nm的病毒粒子,有囊膜。用针对PRRSV VR-2332的PCR引物对分离病毒进行RT-PCR扩增,检测结果阳性。将病毒接种血清阴性仔猪,检测到血清中出现病毒特异性抗体,但未见临床症状及明显的病理变化,将分离株命名为PRRSV SD株。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD株 分离鉴定
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6双基因真核表达载体在哺乳动物细胞中的表达
《病毒学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5和ORF6基因在同一质粒中分别表达各自编码的蛋白,发挥E蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势,将构建成功的pIRES-ORF5/ORF6转移载体用脂质体法转入稳定表达的细胞CHO,经G418加压筛选获得具稳定表达的细胞株。以RT-PCR、SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果表明:RT-PCR检测到两种目的基因的转录;SDS-PAGE和West-ern blot检测到同时表达的两种目的蛋白;间接免疫荧光检测到目的蛋白得到表达。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6 CHO 蛋白的表达
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PRRSV SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：以PRRSV细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5/ORF6基因,该产物和pIRES真核表达载体分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5/ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了真核表达载体pIRES-ORF5/ORF6。测得的ORF5/ORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,属北美洲型。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征 SD2株 ORF5/ORF6基因 转移载体
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PRRSVSD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006 CSCD
摘要：以PRRSV细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF5/ORF6基因,该产物和pIRES真核表达载体分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF5/ORF6。经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了真核表达载体pIRES-ORF5/ORF6。测得的ORF5/ORF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,属北美洲型。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征 SD2株 ORF5/ORF6基因 转移载体
PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ/XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2/ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCR RT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99%,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型(VR-2332株)氨基酸同源性为99%。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2 ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。
关键词： 猪圆环病毒2型 ORF2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 真核表达载体
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