科研产出
猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及NSP2和ORF5基因的变异分析
《西南农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的NSP2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 NSP2基因 ORF5基因 变异分析
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重组N蛋白抗原检测美洲型PRRSV抗体间接ELISA方法的建立
《中国动物检疫 》 2010
摘要：利用表达纯化的PRRSV特异N蛋白抗原表位基因的重组融合蛋白作为抗原,建立了检测PRRSV抗体的间接ELISA方法。研究结果表明重组N蛋白的最适包被浓度为4.5μg/mL,最适包被条件为37℃1 h加4℃过夜,待检血清稀释度为1:40,HRP-兔抗猪IgG(1:1000)37℃孵育30min。经重复性试验、交叉试验等试验结果表明该方法重复性好、特异性强、灵敏度高,与武汉科前ELISA试剂盒的符合率达93.2%。用已建立的方法检测2007年以前临床血清样本983份,总阳性率为48.6%。
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核表达质粒在小鼠的细胞免疫应答
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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含CpG序列PRRSV ORF5重组质粒在小鼠细胞中的免疫
《西北农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,将成功构建含CpG序列PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5免疫SPF小鼠,检测小鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明,构建的含CpG序列真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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PRRSV SX-1株的分离与NSP2和ORF5基因的克隆及变异分析
《家畜生态学报 》 2009
摘要：从山东莘县恒顺猪场发病猪群中分离到PRRSV病毒(SX-1株)。用RT-PCR法对该分离株的NSP2和ORF5基因进行了扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV SX-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与JXA1毒株相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.8%、94.9%、88.9%,氨基酸同源性分别为99.0%、93%、87.5%。基因系统发育树分析结果显示,SX-1与JXA1、HUN株的亲缘关系很近,与CH-1a亲缘关系较近,与VR2332、CC-1、RespPRRS/ReproMLV等毒株处于不同分支。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 NSP2基因 ORF5基因 变异分析
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斑点杂交法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒
《中国动物检疫 》 2009
摘要：斑点杂交技术是一种快速、稳定、高通量的检测方法,在动物疫病的诊断和流行病学调查中发挥着重要作用。在本研究中,通过RT-PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD1株ORF7基因,并以其为模板,制备地高辛标记cDNA探针,并进行了特异性和敏感性检测。利用该探针对50份临床病料进行PRRSV检测,并与RT-PCR进行了比较,结果显示,斑点杂交结果与RT-PCR结果完全一致,探针敏感性和特异性亦较高,说明本研究建立的斑点杂交方法可用于PRRSV临床检测与免疫监测。
关键词： 地高辛标记探针 斑点杂交 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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山东PRRSV流行株ORF5、ORF6、ORF7基因序列的分子特征
《家畜生态学报 》 2009
摘要：采用RT-PCR技术对2001~2007年分离自山东地区10株(ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行ORF5、ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,与已知序列的毒株的相应片段进行同源性分析比较,并对其分子特征进行分析。结果表明:该10株病毒仍属北美洲型,其中2001~2002年分离的SD1株、SD2株和2006年分离的SD6株核苷酸序列之间的ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为99.2%,99.8%,100%,均与北美洲原型代表株(VR-2332株)和疫苗毒MLVRe-spPRRS Repro USA遗传距离较近,同属一大分支;2006~2007年分离的PRRSV ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD3,SD4,SD5,SD7分离株ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为97.8%~100%,99.4%~99.8%,99.2%~99.7%,均与国内96年Ch-1a和2002年HB-1株及2006年分离鉴定的国内高致病性分离株(JXA1、Shanghai、HEB1)同属一个大的分支。首次证实目前山东省同时存在高致病性PRRSV和传统PRRSV,并且有由传统PRRSV向高致病性PRRSV演化的趋势。
关键词： PRRSV 高致病性PRRSV ORF5 ORF6 ORF7 克隆 分子特征
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猪繁殖与呼吸综合征病理组织学观察
《动物医学进展 》 2008 北大核心
摘要：采集患有猪繁殖与呼吸综合征的病死猪肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结,经固定、脱水、透明、浸蜡、切片、HE染色,在光学显微镜下观察以上各脏器的病理变化。结果表明,各脏器主要病理变化是出血和淤血;肺脏的细支气管萎缩,肺泡壁上皮巨噬细胞增生;肝脏有颗粒变性,脾脏白髓周围有"红晕";淋巴结淋巴中心细胞坏死。
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒对猪体免疫作用研究
《中国免疫学杂志 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的:为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,以pVAX1为真核表达载体,以PRRSV ORF5基因为目的基因,构建了含有CpG和PRRSV ORF5的真核表达质粒CpG-pVAX1-ORF5,并在猪体进行了免疫试验。方法:检测猪PRRSV的特异性抗体滴度、IL-2水平以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平,并做了攻毒保护试验。结果:试验结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫(显著的淋巴细胞增殖反应水平)。攻毒结果表明CpG-pVAX1-ORF5组能够有效地抵抗经鼻攻毒,可以保护猪轻微病毒血症,比对照组减少80%,也不表现临床症状,对肺的损害能提供部分保护。结论:CpG的加入可使免疫猪的病变减轻或消失。从而表明含有CpG-ODN能作为PRRSVDNA疫苗的有效佐剂。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 CpG DNA免疫
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CpG-pVAX1-ORF5真核重组表达质粒小鼠细胞免疫的研究
《青岛农业大学学报(自然科学版) 》 2008
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。试验结果表明,本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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