科研产出
花生果糖-1;6-二磷酸醛缩酶基因AhFBA1的克隆与表达
《作物学报 》 2014 CSCD
摘要：以花生品种花育33为试材,根据cDNA文库中已知的果糖-1,6-二磷酸醛缩酶(fructose-1,6-bisphosphatealdolase,FBA)基因全长序列设计引物,通过RT-PCR克隆到该基因,命名为AhFBA1。AhFBA1全长为1489bp,开放阅读框为1200bp,编码400个氨基酸。预测该基因编码的蛋白含有Glycolytic保守结构域,可能定位于叶绿体中。蛋白序列比对和进化树分析表明,花生与大豆(Glycinemax)、苜蓿(Medicagotruncatula)、鹰嘴豆(Cicerarietinum)和菜豆(Phaseolusvulgaris)等豆科植物中...
湖北海棠植物络合素合酶MhPCS基因克隆及表达分析
《果树学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了探明植物络合素酶参与植物解毒重金属的作用,【方法】以湖北海棠(Malus hupehensis)为试材,克隆其植物络合素合酶基因(MhPCS)编码区序列,并研究该基因的表达特点。【结果】结果表明MhPCS基因编码区全长为1 494 bp,编码497个氨基酸。序列分析表明,MhPCS编码的氨基酸序列由2个典型的植物络合素合酶亚家族结构域组成,具有3个相邻的Cys-Cys元件(331-332、351-352和369-370位氨基酸)和植物络合素合酶蛋白的特征位点(Cys-56、Cys-90/91和Cys-109)。【结论】湖北海棠MhPCS与杜梨PbPCS蛋白同源性最高(94%),属于系统发生树的同一分支。MhPCS基因为组成型表达,各器官表达水平存在差异,其中根的表达量最高;100μmol.L-1CdSO4处理48 h内,MhPCS基因的表达量迅速上升;不同金属离子对其上调表达的诱导能力为:Cd2+>Cu2+>Pb2+。这为揭示重金属胁迫下湖北海棠环境适应的分子机制奠定了基础。
关键词： 湖北海棠 植物络合素合酶基因(MhPCS) 克隆 表达
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苹果NADP依赖的苹果酸酶基因克隆、序列和表达分析
《中国农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：[目的]克隆苹果(Malus*domestica B.)中苹果酸代谢的关键酶基因MdNADP-ME,进行序列特征分析,研究MdNADP-ME在苹果中组织表达的情况.[方法]利用RT-PCR技术获得苹果MdNADP-ME1,2,3全长的cDNA序列.对该序列进行生物信息学分析,采用荧光实时定量PCR技术研究MdNADP-ME1,2,3的组织表达.[结果]测序结果显示,获得的3个NADP-苹果酸酶基因(MdNADP-ME1、MdNADP-ME2和MdNADP-ME3;GenBank登录号为JX971883、JX971884和JX971885),其ORF分别为1 512、1 782和1 926 bp,推测其分别编码503、593和641个氨基酸的多肽.氨基酸序列和结构分析显示,这3个基因均含有5个保守的氨基酸区域(motif I-V),含有2个功能结构域:malic和NADbind1malicenz.进化树分析结果显示,MdNADP-ME1和MdNADP-ME2属于双子叶植物细胞质NADP-ME型,MdNADP-ME3属于双子叶植物质体NADP-ME型.荧光实时定量PCR结果表明,MdNADP-ME1-3在被检测的组织中均有表达,但表达差异明显.[结论]MdNADP-ME1-3属于植物NADP-ME家族,结构高度保守,并且在苹果的不同组织中有不同表达模式.
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‘秋天火焰’槭类黄酮糖基转移酶基因(UFGT)片段的克隆及序列分析
《中国农学通报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了从分子层面研究槭树秋季叶片花青苷的合成机理,克隆其花青苷合成相关酶类黄酮糖基转移酶基因(UFGT)全长。以槭树‘秋天火焰’叶片为试材,利用改良的CTAB法提取总RNA,以总RNA为模板,设计简并引物,采用RT-PCR方法扩增出UFGT基因的cDNA片段,该基因片段长397bp,编码132个氨基酸。序列分析结果表明,该cDNA片段与GenBank中报道的荔枝、木薯等物种的氨基酸同源性在50%～60%之间,GenBank登录号为KC140229,试验结果为进一步克隆槭树UFGT基因全长奠定基础。
关键词： 槭树 类黄酮糖基转移酶基因 克隆 序列分析
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苹果NAD–苹果酸酶基因的克隆及在不同组织和果实发育阶段的表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：NAD-malic enzyme(NAD-ME)是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果(Malus×domestica Borkh.)叶片为试材,通过同源比对和RT-PCR技术,克隆获得2个NAD–苹果酸酶基因(MdNAD-ME1和MdNAD-ME2)。其ORF分别为1 785 bp和1 818 bp,推测其分别编码595和605个氨基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示,含有5个保守的氨基酸区域(Ⅰ~Ⅴ),包含2个功能结构域:malic和NAD_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示,MdNAD-ME1属于α组双子叶亚组,MdNAD-ME2属于β组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示,MdNAD-ME在被检测的组织中呈组成型表达,且在多种组织中MdNAD-ME1表达量高于MdNAD-ME2。在富士苹果果实不同发育阶段,MdNAD-ME1与MdNAD-ME2具有不同的表达模式。以上结果表明,克隆得到的MdNAD-ME1和MdNAD-ME2属于植物NAD-ME,在苹果的生长和发育过程中MdNAD-ME1和MdNAD-ME2可能起到不同作用。
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小立碗藓细胞色素P450基因PpCYP51G1的分离及转化载体构建
《山东农业科学 》 2013
摘要：从小立碗藓(Physcomitrella patens)中克隆了细胞色素P450 CYP51基因PpCYP51G1的全长编码序列,编码区长1 509 bp,预测编码488个氨基酸,蛋白二级结构含有自由卷曲、伸展片段和α-螺旋,N端含有一个跨膜区域。构建了PpCYP51G1的功能缺失载体,并利用PEG介导的原生质体转化技术获得该基因的功能缺失转化体;同时,构建了PpCYP51G1-GFP融合蛋白载体,亚细胞定位结果表明,PpCYP51G1定位在内质网中。
关键词： 小立碗藓 细胞色素P450 CYP51 克隆 转化载体构建
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水稻ERECTA基因组DNA的克隆及植物表达载体构建
《山东农业科学 》 2013
摘要：根据水稻ERECTA的cDNA序列(GenBank中的登陆号:Os06g0203800),利用NCBI的Blast工具找到OsERECTA所对应的基因组DNA序列(gERECTA),根据该序列设计2对特异引物,对gERECTA进行分段PCR扩增,并对前后两部分片段进行克隆、测序和拼接。本研究得到的gERECTA序列为8 901 bp,其中包括约1.7 kb的5'区域和约300 bp的3'区域。将拼接起来的gERECTA序列插入到pCAMBIA1390载体,经酶切和测序鉴定,证明重组表达质粒中带有gERECTA基因片段,表明gERECTA植物表达载体pCAMBIA1390-gERECTA已成功构建。
关键词： 水稻 OsERECTA基因 克隆 植物表达载体
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