科研产出
蓝莓不可萃取多酚的纯化及组分分析
《食品科学技术学报 》 2016
摘要：对蓝莓果实中不可萃取多酚进行了提取、分离和纯化,并利用高效液相色谱对其组成成分进行了分析。结果表明,7种大孔树脂中HPD-100C对蓝莓不可萃取多酚的吸附率和解吸率都相对较高;采用大孔树脂HPD-100C进行动态纯化,再利用高效液相色谱分析其组分,得出蓝莓不可萃取多酚中主要物质为飞燕草色素、矢车菊色素、牵牛花色素、芍药花色素、锦葵色素,与可萃取多酚相似,说明两者具有相似组分。
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拟南芥SHORT-ROOT基因稀有密码子分析及其在原核细胞中的表达和纯化
《生物技术通讯 》 2016
摘要：目的:在大肠杆菌中重组表达拟南芥SHORT-ROOT(SHR)蛋白并纯化。方法:将SHR基因编码区克隆至p GEX-4T-2表达载体,构建重组质粒p GEX-4T-2-SHR并转化大肠杆菌Rosetta(DE3),表达产物经谷胱甘肽亲和层析凝胶4B分离纯化,SDS-PAGE分析和Western印迹鉴定。结果:SHR融合蛋白在大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得表达,亲和纯化后,SDS-PAGE显示相对分子质量为预期的86×103,且经Western印迹确证。结论:获得了拟南芥SHR融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。
关键词： 拟南芥 SHORT-ROOT蛋白 稀有密码子 原核表达 纯化
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葡萄籽蛋白质的分离纯化及电泳分析
《江苏农业科学 》 2016 北大核心
摘要：以脱脂脱酚葡萄籽粕为原料,采用碱液浸提法对籽粕中蛋白质进行提取,确定蛋白质的最佳提取条件为温度88℃、浸提液pH值11.5、料液比1 g∶25 m L、提取时间130 min,该条件下蛋白提取率达到83.5%。结合蛋白提取液性质,设计了一套可行的葡萄籽蛋白质纯化方案,初步确定了纯化方案中几个关键点的工艺参数。利用SDS-PAGE电泳对纯化前后的样品蛋白进行检测分析,发现样品蛋白中主要存在4种蛋白亚基,分子量分别为40、37、19、17 ku,纯化后4种蛋白亚基占总蛋白的相对含量为91.5%。
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洋葱粗多糖的纯化工艺研究
《食品工业 》 2015 北大核心
摘要：为探究洋葱多糖纯化的最佳工艺条件,在选择了Sevag法去蛋白及透析去离子工艺后,重点对大孔树脂AB-8脱除洋葱多糖色素的工艺进行了研究。试验结果表明,在静态吸附动力学过程中,在树脂用量为2 g/20 m L提取液,吸附时间为2 h的最佳工艺条件下,大孔树脂吸附洋葱多糖溶液的多糖保留率和色素的清除率均达到80%左右;在动态动力学吸附过程,在上柱液p H 5.0、温度40℃、多糖质量浓度3 000 mg/L的最佳工艺条件下时洋葱多糖提取液的多糖保留率为85%左右,色素脱除率为83%左右。洋葱粗多糖经过Sevag法脱蛋白,大孔树脂脱除多糖色素,透析去离子等纯化工艺后,最终多糖纯度可以达到89.2%左右。
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新型免疫佐剂环二鸟苷酸的制备与纯化
《细胞与分子免疫学杂志 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：目的制备新型免疫佐剂环二鸟苷酸(c-di-GMP)并进行纯化。方法利用前期重组构建并在大肠杆菌中成功表达的霍乱弧菌VCA0956蛋白(含有GGDEF结构域)作为合成酶,在反应体系中采用酶促反应将2分子鸟苷酸GTP催化缩合成一分子c-di-GMP。利用反相液相色谱仪分离纯化粗产物中的c-di-GMP,柱温25℃,流动相为乙腈-10 mmol/L乙酸铵溶液(体积比为5∶95逐渐变为30∶70),流速1 m L/min。结果 c-di-GMP从反应粗产物中被有效的分离纯化,同时,经质谱分析仪分析鉴定,获得高纯度的c-di-GMP。结论成功从酶促反应体系中分离并纯化了c-di-GMP。
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降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YJ-1角蛋白酶纯化及酶学性质研究
《西南农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda。结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30～40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH 7.0～9.5的范围内具有较好的稳定性。金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2+、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用。EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶。
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降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1角蛋白酶纯化及酶学性质研究
《西南农业学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：利用硫酸铵分级沉淀和交联葡聚糖G-100凝胶柱纯化了高效降解羽毛的嗜麦芽窄食单胞菌YHYJ-1所产角蛋白酶,纯化的角蛋白酶,经SDS-PAGE蛋白电泳分析,分子量为48.3 kda.结果表明,该酶最适反应温度和最适pH值分别为50℃和9.0,30~40℃具有较好的温度稳定性,60℃酶活下降很快;在pH7.0 ~9.5的范围内具有较好的稳定性.金属离子Ni2+、Zn2+对角蛋白酶具有明显抑制作用,Cu2+、Fe2、Fe3+能完全抑制酶活;1%巯基乙醇对酶具有明显激活作用.EDTA和PMSF对该角蛋白酶几乎完全抑制,可判定该酶是丝氨酸金属蛋白酶,是一种新的蛋白酶.
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虹鳟Ⅰ型干扰素基因的表达与纯化
《动物医学进展 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为了获得能用于抗虹鳟(Rainbow trout,学名,Oncorhynchus mykiss)病毒性疾病生物制剂开发的高纯度Ⅰ型干扰素(rtIFN3)蛋白,克隆了虹鳟rtIFN3,构建了pET21a-rtIFN3/BL21(DE3)原核表达与发酵系,并对rtIFN3进行了表达。重组的rtIFN3分子质量约18.5ku,以包涵体形式表达,表达量占全菌蛋白量的16%。随后,提取2L发酵瓶的包涵体蛋白,经变性与复性后,再经分子筛和阴离子交换层析进行纯化。纯化后,rtIFN3SDS-PAGE电泳结果表明蛋白纯度达98%,复性率为3%。本研究获得的高纯度复性蛋白为生物制剂的研制提供了材料。
关键词： 虹鳟干扰素(rtIFN) 表达 发酵 纯化
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重组鸡Cathelicidins类抗菌肽的融合表达及其对金黄色葡萄球菌抗菌活性的研究
《中国畜牧兽医 》 2013 北大核心
摘要：Cathelicidins抗菌肽在家禽天然免疫系统中发挥重要作用,本研究将已构建的含Cathelicidins抗菌肽成熟肽的阳性克隆菌株Rosetta(DE3)/pET30-CathL1S、pET30-CathL2S、pET30-CathL3S分别在37℃、1.0mmol/L IPTG的条件下进行诱导表达。SDS-PAGE和Western blotting分析结果表明,Cathelicidins成熟肽片段均在大肠杆菌中以融合形式成功表达,表达产物的表观分子质量分别为7、8、7.5ku。琼脂糖孔穴扩散法检测结果显示,表达产物对多种革兰氏阴性菌和阳性菌均具有很好的抑制活性,其对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、藤黄微球菌(Micrococcusluteus)、大肠杆菌(Escherichia coli)、鸡白痢沙门氏菌C79-13(Salmonella pullorum)、巴氏杆菌、鸭疫里默氏杆菌及绿脓杆菌等供试菌株均有较强的抑制作用,尤其对抗生素耐药菌株有明显的抑制作用。以雏鸡为实验模型研究重组抗菌肽对金黄色葡萄球菌的体内抗菌活性,结果表明,注射中、高剂量CathL-1抗菌肽试验组(5、10mg/kg),在试验结束后取肝脏组织匀浆液涂布于TMP平板,未分离到葡萄球菌。各抗菌肽试验组平均增重均高于感染对照组,其中低剂量抗菌肽试验组(2.5mg/kg)体内抑菌效果虽与普通抗生素相当,但其增重效果尤为明显。
关键词： 抗菌肽 Cathelicidins 融合表达 纯化 抑菌活性 金黄色葡萄球菌
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