科研产出
基于干种子DNA的洋葱杂交种纯度分子标记快速鉴定
《山东农业科学 》 2023 北大核心
摘要：为了寻找一种从洋葱种子中快速提取高质量DNA的方法,并能满足大量准确鉴定洋葱杂交种纯度的要求,本研究首先对全式金PlantZol试剂盒、天根快捷型植物基因组DNA提取系统、TPS法和CTAB法提取的洋葱种子DNA质量进行比较,筛选出最佳提取方法,并对不同发芽天数的种子及提取有效DNA的种子数量进行优化筛选,然后利用SCAR分子标记对洋葱杂交种的纯度进行鉴定,进一步验证洋葱种子DNA的提取质量.结果表明,天根快捷型植物基因组DNA提取系统未能成功得到洋葱干种子基因组总DNA;CTAB法提取的基因组总DNA带型整齐一致、单一明亮,条带无拖尾和降解现象,也没有明显的RNA和蛋白污染;洋葱干种子以 1粒和发芽3d提取的DNA更加完整,纯度更高.以CTAB法提取的1粒洋葱干种子基因组总DNA为模板,对杂交种Ms位点的基因型进行SCAR标记鉴定,PCR扩增条带清晰明亮,根据条带的迁移位置可以清楚区分洋葱不同细胞核基因型之间的差异.综上,本研究确定了CTAB法为洋葱干种子基因组总DNA提取的最佳方法,1 粒洋葱干种子获得的有效DNA完全可以满足杂交种分子标记鉴定的要求,实现洋葱杂交种纯度的早期鉴定.
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一种快速高效提取花生叶片DNA的简化方法
《花生学报 》 2019 北大核心
摘要：为获得适用于高通量测序的高质量花生叶片DNA,本方法取第三对真叶为实验材料,设计烧制圆球状枪头和离心管装置代替研钵研磨,并在CTAB法的基础上在杂质沉淀前快速分离DNA等简化方法提取DNA。琼脂糖凝胶电泳检测结果表明DNA条带清晰、完整性高。经超微量分光光度计检测,DNA浓度范围在104～131ng/μL,OD_(260)/OD_(280)为1.7～2.0,OD_(260)/OD_(230)大于2.0,说明杂质少,可获得高纯度,高浓度的DNA。此方法与常用的植物基因组DNA提取方法相比,具有成本低、时间短、质量高的优点,可用于基因组重测序、分子生物学技术以及分子标记筛选等后续研究,可提高花生分子育种与筛选工作效率。
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发菜基因组DNA提取方法比较与分子鉴定研究
《药学研究 》 2018
摘要：目的以发菜为研究对象比较不同的提取DNA方法,筛选出了一种适合快速提取发菜DNA的方法。方法分别利用自主研发的硅珠DNA纯化技术、细菌试DNA提取试剂盒和植物DNA提取试剂盒提取发菜基因组DNA。结果本实验室开发的硅珠DNA提取纯化技术具有快速、无毒以及获得的发菜DNA纯度高等优势。通过聚合酶链式反应(PCR)扩增和测序得到16S rRNA基因,利用Blast软件进行序列比对,与发菜同源性为99%。结论本研究研制的发菜基因组DNA提取方法可用于发菜源性的分子鉴定。
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苹果炭疽菌DNA改良提取法及PCR体系的优化
《江西农业学报 》 2017
摘要：以苹果炭疽病胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)为试材,采用改良的SDS法、改良的CTAB法和改良的尿素法等对基因组DNA进行了提取和比较,并对ITS1-5.8S-ITS2区基因PCR扩增体系中模板的添加量以及退火温度进行了调整和优化。结果表明:采用这3种方法均能提取得到目的 DNA,但采用改良的SDS法提取的基因组DNA产率最高、质量最好;当在25μL PCR体系中添加0.75μL粗提DNA 10倍稀释液以及退火温度设定为51℃时PCR产物的质量最高。
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动物皮张基因组DNA三种提取方法比较
《山东农业科学 》 2015
摘要：以干燥的驴皮张样品为试验材料,将SDS-蛋白酶K法与Chelex-100法相结合,创新性地引入玻璃奶DNA纯化技术,提取全基因组DNA,并将此方法与前人发表的陈旧皮张DNA提取方法和试剂盒提取方法进行比较分析。结果表明,本研究发明方法提取的基因组DNA纯度较高,杂质较少,且操作简单,所用试剂、仪器费用较低,能更好地应用于分子生物学实验。
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一种从阿胶及制品中提取DNA的新方法
《食品与药品 》 2015
摘要：目的建立一种从阿胶及制品中提取微量DNA的方法,为从分子水平鉴别阿胶中动物源性奠定基础。方法选取市场常见的阿胶补血口服液、复方阿胶浆、阿胶膏和即食阿胶块等4种不同的阿胶制品,使用SDS-蛋白酶K结合Chelex-100法提取DNA,利用玻璃奶纯化DNA。结果此法可从不同阿胶产品中提取微量DNA,其中阿胶膏中获得DNA浓度最高,即食阿胶块次之,复方阿胶浆和阿胶补血口服液中最少。PCR扩增获得片段利用琼脂糖凝胶电泳和DNA测序验证与目的片段一致。结论建立了从阿胶及其制品中提取高质量DNA的新方法。
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玉米叶面微生物DNA提取方法及PCR引物的筛选
《山东农业科学 》 2012
摘要：传统的微生物培养方法在反映叶面微生态信息上具有局限性,因此逐渐被分子生态学所代替,而获得高质量、大片段、无偏好的总DNA是研究叶面环境微生物的基础。本文采用改进的Sambrook法、CTAB法、改良的化学法以及试剂盒法对玉米生长初期、中期、末期的叶面微生物总DNA进行提取,并对4种方法提取的DNA片段的大小和产量进行综合评价。将得到的DNA用引物357/518以及984/1387对细菌16S rDNA进行扩增;用5种常见引物NS1/fung、ITS1-F/ITS2、NS1/AM1、EF4/fung5、SSU-0817/SSU-1196对真菌18SrDNA进行扩增。结果表明:4种方法提取的DNA片段均适用于PCR,但DNA的得率和纯度有一定差别,其中以试剂盒提取效果最好。PCR结果显示,除化学法外,其他3种方法提取的DNA均能够获得目的条带;并通过比较得出引物984/1387对16S rDNA以及ITS1-F/ITS2对18S rDNA扩增效果较好且扩增量最大。
关键词： 玉米 叶面微生物 DNA提取 PCR 16SrDNA 18SrDNA
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一种提取核桃基因组DNA的改进方法
《山东农业科学 》 2008
摘要：以核桃幼嫩叶片为材料,针对核桃体内富含酚类、多糖等次生物质,采用改良的CTAB法,提取其基因组DNA,经0.8%琼脂糖凝胶电泳检测,蛋白、多糖、RNA等去除较干净,适用于分子标记及其分子生物学的研究。
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