科研产出
一株裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其生物学特性与全基因组分析
《山东农业科学 》 2024 北大核心
摘要：本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料.以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测序分析.结果分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,效价达2.75×1010 PFU/mL,命名为SP688.该噬菌体具有长的不收缩尾巴,属长尾噬菌体科,对 7 株耐氨苄西林金葡菌均有裂解效果,最佳感染复数为 1,可在10h内抑制细菌生长,在温度-20~54℃范围和pH值3~11 之间活性稳定,对紫外线敏感.全基因组分析显示,SP688 基因组为环状DNA,全长 45 499 kb,GC含量为 34.1%;预测到 64 个开放阅读框(ORFs),其中 19 个(29.69%)被预测功能.该噬菌体是一株新型裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的广谱噬菌体,可为噬菌体治疗提供材料.
关键词： 金黄色葡萄球菌 噬菌体 形态 生物学特性分析 全基因组分析
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PH826噬菌体与抗生素联用有效抑制多重耐药铜绿假单胞菌生物被膜的形成
《微生物学报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）是一种重要的革兰氏阴性病原体，可以加重囊性纤维化患者的肺部感染，最终会导致患者的死亡。然而由于多重耐药（multi-drug resistant,MDR）和泛耐药（pan-drug resistant, PDR）铜绿假单胞菌菌株的出现，使其防控变得更为严峻。【方法】从养殖场污水中分离能有效裂解多重耐药铜绿假单胞菌的噬菌体，研究其形态特征、生物学特性、宿主谱范围、基因组特征和体外抑菌能力等，并采用噬菌体和抗生素联用的方法进行生物被膜的抑制试验。【结果】透射电子显微镜的形态分析和基因组分析结合表明，该噬菌体属于Nankokuvirus病毒属。生物学特性试验表明，PH826具有广泛的温度稳定性（4-60℃）和pH稳定性（3.0-11.0）。宿主谱测试显示，PH826可以裂解13株铜绿假单胞菌（包括人源和动物源），体外抑菌试验显示，PH826在感染复数（multiplicity of infection, MOI）分别为10、1、0.1时对铜绿假单胞菌均有强烈的裂解作用。根据基因组分析，PH826噬菌体的基因组大小为87 956 bp,G+C含量为54.70%，编码165个开放阅读框（open reading frames, ORFs），并预测携带有裂解酶。值得注意的是，在24 h和48 h内，PH826和环丙沙星联用在1×、2×、4×最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）的条件下都减少了80%以上的生物被膜的形成；PH826和美罗培南联用在24h和48h内，在2×MIC和4×MIC的条件下也减少了80%以上的生物被膜的形成。【结论】PH826可能是一种潜在的消毒剂和治疗剂，可以单独使用或与抗生素联合使用，用于预防和治疗致病性铜绿假单胞菌。
关键词： 噬菌体 铜绿假单胞菌 生物被膜 多重耐药性 抗生素
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金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性研究
《山东农业科学 》 2023 北大核心
摘要：本研究利用分离自生鲜牛乳样品中的金黄色葡萄球菌作为宿主菌，从污水中分离得到一株噬菌体，命名为RPCSa20091。对其生物学特性研究结果显示，该噬菌体属于微球形有尾目噬菌体；宿主谱较宽，裂解率为81.8%;在40℃条件下噬菌体相对稳定，45℃条件下不生长；pH值在3～10时较稳定，pH值在1～2和11～12时噬菌体完全失活；其最佳感染复数为0.1;潜伏期为15 min,裂解周期为75 min。本研究结果为金黄色葡萄球菌噬菌体用于奶牛乳腺炎的治疗提供了理论基础。
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粪菌移植结合噬菌体抵抗雏鸡沙门氏菌感染的作用
《山东农业科学 》 2021
摘要：本试验研究了粪菌移植（fecal microbiota transplantation）与噬菌体（phage）的结合疗法抵抗雏鸡肠炎沙门氏菌感染的作用。试验设置4个处理,分别为Ca组（口服PBS缓冲液且攻毒）、Cb组（口服PBS缓冲液且不攻毒）、FPa组（粪菌移植与噬菌体结合疗法且攻毒）和FPb组（粪菌移植与噬菌体结合疗法且不攻毒）。每组隔离饲养至40日龄,记录不同日龄每组鸡的死亡率和体重变化,病理切片法分析肠道绒毛长度、隐窝深度和肝脏病理变化,PCR方法检测肝脏中沙门氏菌的定殖情况,ELISA方法检测血清中细胞因子水平。结果表明:粪菌移植与噬菌体的结合疗法可以降低沙门氏菌感染导致的雏鸡死亡率,促进雏鸡的体重增长;在一定程度上提高了雏鸡的免疫水平,减少了攻毒雏鸡肝脏的炎性病变,清除了肠炎沙门氏菌在雏鸡肝脏中的定殖;增强了雏鸡的消化吸收能力。综上,粪菌移植与噬菌体的结合疗法能帮助雏鸡抵抗沙门氏菌的感染,并促进雏鸡的健康生长。
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噬菌体vB＿SalS＿DZ的生物学特性及对鸡沙门氏菌病的疗效
《山东农业科学 》 2018
摘要：抗药性沙门氏菌的出现,严重影响了抗生素对沙门氏菌病的治疗效果,而噬菌体治疗是一种可能的替代方法。本试验研究了沙门氏菌噬菌体vB_SalS_DZ的基本生物学特性及其对沙门氏菌SM86的治疗效果。噬菌体vB_SalS_DZ的生物学特性分析显示其效价可达109pfu/m L,透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。对p H值的适应范围宽,在p H值4~12内能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适p H值在5.0左右。最佳感染复数为10-6,感染宿主菌的潜伏期和爆发期均为60 min;基因组中不携带抗性基因和毒力基因。噬菌体vB_SalS_DZ可以使感染沙门氏菌病的SPF鸡死亡率降低50个百分点,这表明该噬菌体在治疗特定的沙门氏菌感染中具有较大的应用潜能。
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噬菌体在食品工业中的应用综述
《江苏农业科学 》 2018 北大核心
摘要：随着人们生活水平的提高,食品安全问题越来越受关注。抗生素的滥用、耐药细菌的出现及逐年增多的食物中毒事件,加剧了食品安全问题的恶化,因此亟需一种天然、安全的可以对抗食源性病原菌的抗生素替代品。同时,为了减少食物中毒事件的发生,亟需快速、灵敏的食品检验手段。噬菌体具有分布广泛、专一性强、对人体无毒副作用、繁殖速度快且生产成本低等优点,使其在食品工业中的应用越来越广泛。本文就噬菌体的分类与其生命周期以及噬菌体在食品检验、食品生物防治等领域的应用进行了阐述,并对噬菌体在食品工业中的应用优势及存在的问题进行了分析,并概述了相应的解决方案。
关键词： 噬菌体 分类 生命周期 食品检验 生物防治 应用优势 存在问题 解决方案
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棋盘试验优化噬菌体与大肠埃希菌的最佳感染复数
《中国抗生素杂志 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：目的利用棋盘法测定噬菌体与大肠埃希菌在不同浓度比条件下的杀菌作用,优化传统的最佳感染复数试验。方法先利用96孔培养板纵向10倍梯度稀释噬菌体,再利用新的96孔板横向10倍梯度稀释大肠埃希菌,最后用排枪分别从稀释好的噬菌体孔板和稀释好的菌液孔板中吸取100μL混合液转移到同一个新孔板中混合培养。用96点阵检测板沾取过夜培养的混合液分别接种于LB固体琼脂检测板与LB宿主菌半固体琼脂检测板上,37℃培养14h。结果受噬菌体密度和宿主菌的数量的限制,多重性感染(multiplicity of infection,MOI)基本上在109~1010PFU/m L范围内波动,这种差异并没有本质的区别。棋盘试验3种方法都一致显示大肠埃希菌浓度低于106CFU/m L,噬菌体效价高于104PFU/m L时,呈现稳定的杀菌效果;固体检测板结果显示在呈现稳定的杀菌效果的区域内外,也有不同生长程度的菌落;半固体检测板均出现噬菌斑,表明两者作用结束后都有噬菌体存留,并生长成为充分的噬菌斑,但MOI测定时效价在一个数量级内有差异。结论 MOI试验着眼于噬菌体裂解固定数量的宿主菌的能力,棋盘试验则是着眼于对宿主菌的裂解杀灭活性;利用96孔液体培养板棋盘法可以很好的确定噬菌体与大肠埃希菌作用有效范围和最低噬菌体使用浓度,可以为杀灭不同浓度宿主大肠埃希菌提供噬菌体效价参考。一般情况下细菌的浓度最高达到109~1010CFU/m L,考虑到实际细菌的感染量不会太高的情况,采用105PFU/m L噬菌体能起到可靠的杀菌作用。
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噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析及对鸡大肠杆菌的疗效
《畜牧兽医学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为了解决目前严重的抗生素耐药性,寻找抗生素的替代品,作者探究了大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的基本生物学特性及其对致病性大肠杆菌1019的治疗效果。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3的生物学特性分析显示其效价可达到10~9pfu·mL~(-1),透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。热稳定性较好,在60℃保温1h后噬菌体效价仍可达到10~7pfu·mL~(-1)以上。对pH值的适应范围较宽,在pH4~10内仍能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适pH在7.0左右。最佳感染复数(MOI)为0.1,感染宿主菌的潜伏期20min,爆发期70min。大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3对大肠杆菌1019有较强的裂解能力,可使SPF鸡肠道内大肠杆菌1019的数量降低96.5%。该大肠杆菌噬菌体RZⅢ-3在治疗特定的大肠杆菌感染中具有较大的应用潜能。
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