科研产出
睾丸特异蛋白Y基因(TSPY)对奶牛早期胚胎性别的鉴定
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为方便性别鉴定方法在现场应用,利用睾丸特异蛋白基因(TSPY)建立了奶牛早期胚胎的非电泳性别鉴定方法。设计并合成了TSPY雄性特异和雌、雄共有基因引物,并利用已知性别的奶牛血液DNA为模板,初步建立了性别鉴定的PCR反应体系和非电泳的性别鉴定方法。灵敏度试验结果显示,雄性特异引物和共有基因引物对在模板10～60pg时,其性别鉴定的准确率为100%,提示TSPY基因具备鉴定胚胎性别的可能;同时采用非电泳法和环介导的等温扩增(LAMP)法鉴定6枚胚胎的性别,两者结果完全一致;用非电泳法检测TSPY基因鉴定了43枚胚胎的性别,对其中鉴定为雌性的21枚胚胎分别移植给自然发情后6～8天的受体,结果9头出生的犊牛均为母牛。结果表明,TSPY基因是一个很好的雄性特异标记,非电泳检测TSPY基因对奶牛早期胚胎性别的鉴定结果准确可靠。
关键词： 奶牛胚胎 性别鉴定 睾丸特性蛋白Y基因(TSPY) PCR
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融合蛋白C3d提高新城疫灭活苗的免疫原性
《西南农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：补体C3d是补体系统(complement system,CS)中补体C3的最终裂解产物。本试验利用RT-PCR技术从AA肉鸡肝脏总RNA中扩增C3d cDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3),1%IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒(Lasota株)经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验(HI)检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。
关键词： C3d RT-PCR 亲和层析 MTT 血凝抑制试验
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PCR扩增血浆凝固酶基因检测致病性金黄色葡萄球菌
《生物技术通报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：金黄色葡萄球菌致病株能同时产生两种蛋白质,一种分泌于菌体外,另一种结合在菌体表面,它们能使含有抗凝剂的家兔或人的血浆凝固,称为凝固酶(Coagulase)。凝固酶是检验致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。试验根据GenBank公布的血浆凝固酶序列,设计特异PCR引物,利用聚合酶链式反应扩增出金黄色葡萄球菌凝固酶基因,克隆测序,与Genbank中已公布的序列同源性达到100%,并且检测结果与用兔血浆进行血浆凝固酶实验结果完全吻合,建立了金黄色葡萄球菌性乳腺炎的快速诊断方法。
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检测奶牛乳房炎主要病原菌的多重PCR方法的建立与应用
《中国兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：本试验针对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、大肠杆菌3种主要的乳房炎病原菌设计了3对特异性引物,建立了多重PCR检测方法。结果表明,本方法的特异性为100%,最低检测浓度为1.25×103cfu/mL,充分表明该方法具有快速,准确和特异的优点。
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鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析
《山东农业科学 》 2008
摘要：以鸭肠炎病毒(DEV)SD-01株DNA为模板,根据GenBank上已发表的基因序列设计一对引物,利用PCR技术扩增出US2全基因,将目的条带连入pGM-T载体,得到的阳性重组质粒命名为pGM-US2并进行序列测定。将测序结果与疫苗株、鸭瘟鸡胚化弱毒疫苗(C-KCE)株和单纯疱疹病毒-1型(HSV-1)、马立克氏病病毒(MDV)、伪狂犬病病毒(PRV)的US2基因同源性进行比较,发现核苷酸和氨基酸的序列同源性分别为100%~25.8%和100%~28%。结果表明,US2基因在DEV中是完全保守的,但与其它疱疹病毒相比同源性较低。
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RT-PCR快速检测牛病毒性腹泻病毒方法的建立与应用
《中国兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5'-UTR序列,设计1对特异性引物,建立了快速检测BVDV的RT-PCR方法。利用该方法能从BVDV中扩增出196bp特异性目的片段。应用此方法检测了26份疑似病例临床样品,14份为阳性。试验表明,该方法特异性强、敏感性好,能检测到1pg的病毒RNA,是一种快速准确的检测方法。
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山东地区猪流感的流行病学调查与分析
《畜牧与兽医 》 2008 北大核心
摘要：猪是禽流感病毒"禽-猪-人"传播链中重要的中间宿主,了解猪流感的疫情动态将为流感的预防提供重要依据。血清学和病毒学监测发现我国猪群存在大范围的H1和H3亚型猪流感感染,本研究应用基因芯片诊断技术对2006年9月至2007年6月间来自山东各地发病猪群的922份样品进行了猪流感病毒的分型检测,结果显示猪流感病毒阳性89份,阳性率为9.65%,其中H1N1,H3N2和H9N2的阳性样品数分别为31、57、1。这为了解山东猪流感病毒的发生和分布,并采取相应的公共卫生措施提供了依据。
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狂犬病病毒低密度基因芯片的建立及其与常规检测方法的比较研究
《江苏农业科学 》 2007 北大核心
摘要：根据已发表狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成扩增高度保守核(N)蛋白片断的引物。通过生物素标记的RT-PCR技术和微量点样技术,将高度保守N蛋白基因片段作为探针点,在硝酸纤维素膜上制成16点阵的低密度诊断基因芯片。提取160份可疑犬的血液,以核酸作模板进行RT-PCR扩增,将其产物分别用琼脂糖凝胶电泳和低密度芯片检测;同时采用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立间接ELISA的检测方法。试验结果表明,RV低密度基因芯片的检测率比ELISA方法和RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,完全可以作为临床诊断的一种方法。
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