科研产出
半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立
《中国人兽共患病学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：目的根据牛轮状病毒的VP7基因设计了一对可以检测牛轮状病毒G6血清型的引物,成功地检测了牛轮状病毒G6血清型。使用该方法检测牛病毒性腹泻-粘膜病病毒,检测结果为阴性。敏感性试验表明本实验方法可以检测10-4稀释的样品。通过对23份临床样本的检测证实,PCR方法比聚丙烯酰胺凝胶电泳和病毒的分离试验灵敏度高,可以快速诊断轮状病毒病,并且能够同时鉴定轮状病毒主要血清型。
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山东省鸭瘟病毒jh株的分离鉴定
《中国畜牧兽医 》 2005
摘要：从山东省某疑似鸭瘟发病区分离到1株病毒,经血清中和试验、动物回归试验鉴定为鸭瘟病毒。该毒株与鸭瘟标准强毒的血清型一致,对氯仿敏感,无血凝特性,鸭胚半数致死量DELD50为10-4.02/0.2 ml。根据GenBank中鸭瘟病毒的UL6和UL7基因序列,合成1对引物,对该分离株进行PCR鉴定,结果表明,所扩增片段与参考序列AF043730的同源性为99.7%。
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牛白细胞介素18成熟蛋白cDNA基因的克隆和表达
《畜牧兽医学报 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：应用RT-PCR技术分别从脂多糖(LPS)活化的牛脾脏细胞和肺泡巨噬细胞中克隆到编码牛白细胞介素(bIL-)18成熟蛋白的cDNA基因,其大小为480 bp。将bIL-18克隆到pET32a(+)质粒中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析,得到了分子量为38ku的融合蛋白,该蛋白经纯化并复性后,具有诱导MDBK分泌IFN-γ的活性,并且可以刺激ConA活化的外周血单核细胞(PBMC)增殖。使用半定量RT-PCR对其mRNA的体内表达进行了测定,发现不论是否加入刺激剂,牛巨噬细胞都可以持续的表达IL-18 mRNA,但是被LPS活化的PBMC只有微弱表达,肝和脾细胞经LPS活化后也可以检测到IL-18 mRNA的表达,其水平明显高于PBMC,在不同细胞中表达的差异可能反映了其产生成熟IL-18的能力。
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16S rRNA PCR鉴定嗜酸乳杆菌鸡源分离株
《中国微生态学杂志 》 2005 CSCD
摘要：用自行设计的嗜酸乳杆菌16 S r RNA的特异性引物和建立的PCR方法对初步鉴定为嗜酸乳杆菌的鸡源分离株进行检测。PCR检测结果表明分离株和嗜酸乳杆菌参考株扩增出大小一致的目的片段,从分子水平对鸡源分离菌进行了鉴定
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PCR用于鸭瘟病毒诊断的研究
《中国预防兽医学报 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据鸭瘟病毒UL6和UL7基因序列,设计合成了一对引物,以2株疫苗株1、株强毒株和1株山东分离株DNA为模板,进行PCR扩增,得到预期690 bp的目的片段。将扩增的目的片段克隆到pMD18_T载体,经Amp平板筛选,HindIII、BamHI双酶切鉴定,获得阳性重组质粒。对重组质粒进行序列测定,与参考序列比较,山东分离株与参考序列的同源性为99.7%,其余3株DPV与参考序列的同源性均为100%。应用PCR可检测人工感染和自然感染鸭瘟的组织中的鸭瘟病毒,表明PCR检测鸭瘟病毒具有很高的特异性、敏感性,该法能够用于鸭瘟急性及亚临床感染的检测与诊断。
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马铃薯S病毒外壳蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达
《园艺学报 》 2004 北大核心 CSCD
摘要：以田间采集的马铃薯病叶中提取的马铃薯病毒S(PVS)总RNA为模板,通过RT-PCR获取长度为890 bp的PVS-cp的cDNA,克隆至pGEM-T载体上。酶切回收该基因片段,并构建了该基因的原核表达质粒pBV-pvs。SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析表明:PVS-cp基因在大肠杆菌JM109中可特异地高效表达分子量约33kD的蛋白,且表达蛋白具有良好的抗原活性。利用该表达产物免疫动物家兔,获得的抗血清可用于大田马铃薯S病毒的快速检测。
关键词： 马铃薯 马铃薯S病毒 外壳蛋白基因 RT-PCR 序列分析 Western印迹 抗血清制备
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鸡传染性支气管炎山东A株病毒S_1高可变区基因的克隆
《中国预防兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：参照国外已发表的M41高可变区S1序列设计一对引物 ,跨度为 1 .7kb左右。采用差速离心法浓缩病毒 ,提取病毒RNA ,经RT_PCR扩增 ,得到与设计同样大小的PCRDNA片段 ,将PCR产物纯化 ,与质粒载体 (pGEM_TEasyVector)连接 ,并转入大肠杆菌JM1 0 9,获取阳性克隆。增菌培养后用小量碱提取法提取质粒 ,利用PCR扩增法与EcoRI酶切分析进行鉴定。对阳性质粒DNA进行测序 ,利用Omiga2 .0、Dnasis等分子生物学软件进行分析 ,并与标准M41株、T株等进行序列比较 ,结果表明 :山东传支A株与标准M41株同源性较高 ,最大同源率为 99% ;与标准T株同源性较差 ,最大同源率为 80 %。理论酶切图谱与M41相同 ,为同一基因型。
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