科研产出
鸡传染性支气管炎病毒山东分离株S1的测序分析及致病性
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：从山东某地疑似患肾型鸡传染性支气管炎(IB)的病死鸡的肝、肺、肾脏中分离到1株病毒,经过SPF鸡胚传代接种、血凝试验、鸡胚矮化试验、RT-PCR鉴定及测序分析、动物回归试验,确定为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为SD/04/18株.结果显示,经3%胰蛋白酶处理后,病毒分离株有血凝性,未经处理病毒分离株不具有血凝性;鸡胚矮化试验发现该毒株明显抑制胚胎发育;进化树比对发现,该毒株与我国主要流行的QX株同源性最高,S1基因序列相似性为96.4%,氨基酸序列相似性为95.3%.分离株用SPF鸡胚连续传3代后接种8日龄SPF雏鸡,复制出了与自然病例相同的临床症状,肺、脾、肾、气管等器官出现典型病理变化.免疫组织化学法检测在气管环纤毛、肾小管上皮细胞间隙等部位可见抗原聚集.对被感染试验鸡的口腔、泄殖腔排毒进行跟踪检测,直到试验结束,被感染鸡仍有很高的病毒检出率.结果表明,最终确定该毒株为肾型鸡传染性支气管炎病毒.
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 分离 鉴定 S1基因 病理变化 免疫组化
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防治蔬菜灰霉病的生防菌SFJ1的鉴定及抑菌活性
《农药 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：[目的]为创制生物农药,对一株生防菌SFJ1进行了菌种鉴定,同时考察其抑菌活性。[方法]通过生理生化和16S rDNA基因序列分析,对生防菌SFJ1进行鉴定;通过含毒介质法和叶面喷雾法,分别测定生防菌的室内毒力和盆栽防效。[结果]生防菌SFJ1鉴定为贝莱斯芽胞杆菌,对黄瓜灰霉病室内EC_(50)和EC_(90)值分别为0.6594×10~4、36.0036×10~4 cfu/mL;经生防菌发酵原液处理后,黄瓜灰霉病的盆栽4、7 d防治效果分别为86.84%和84.09%。[结论]该生防菌具有开发成生物农药的潜力。
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吉林地区一株鸡传染性法氏囊病毒的分离与鉴定
《家禽科学 》 2018
摘要：为确定引起吉林省某鸡场死亡的病原,剖检送检病死鸡,采集法氏囊、肝脏、脾脏等样品,经研磨无菌处理后接种SPF鸡胚传代,再经CEF细胞盲传进行病毒分离、PCR检测、动物回归、电镜观察、间接免疫荧光鉴定。研究结果表明鸡胚出现水肿出血、电镜可见病毒粒子,间接免疫荧光可见阳性绿色荧光,成功分离鉴定病原为鸡传染性法氏囊病毒(Infectious Bursa Disease Virus,IBDV),命名为JL-01/2007,为IBDV流行分布提供数据支持。
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山东茶园土壤几丁质降解菌的分离、鉴定及产酶特性研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为了筛选到适合山东茶园土壤环境的几丁质降解菌,以提高土壤几丁质的降解速率,本试验以胶状几丁质为唯一碳源,从山东省泰安市茶园土壤中筛选出两株高活性几丁质降解菌,命名为J4、J17。通过生理生化、形态观测和分子鉴定,确定J4属于鞘氨醇杆菌属,J17属于芽孢杆菌属。产酶特性研究表明,最优产酶条件菌株J4为培养温度30℃、pH值7.0、转速200 r/min,J17为培养温度25～30℃、pH值7.0、转速180 r/min;混合菌株J4+J17的产酶能力比J4、J17单一菌株的产酶能力高,分别高出9%和23%。本研究结果可为后续菌剂的制备及工厂化发酵研究奠定基础。
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山东鲜食葡萄主要类病毒的鉴定及序列分析
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】通过对山东省鲜食葡萄主产区采集的149份疑似感病葡萄叶片进行RT-PCR检测,明确本地区类病毒的发生情况及种类,并进行序列分析。【方法】提取叶片总RNA后,用目前国内报道的葡萄黄斑类病毒1(Grapevine yellow speckle viroid 1,GYSVd1)、葡萄黄斑类病毒2(Grapevine yellow speckle viroid 2,GYSVd2)、澳大利亚葡萄类病毒(Australian grapevine viroid,AGVd)、啤酒花矮化类病毒(Hop stunt viroid,HSVd)和柑橘裂皮类病毒(Citrus exocortis viroid,CEVd)的特异性引物对采集的具有黄化、斑驳、皱缩和畸形症状的葡萄叶片进行RT-PCR检测并测序,同时建立系统进化树。【结果】GYSVd1、GYSVd2、AGVd和HSVd均得到了预期大小的目的片段。测序表明,山东省鲜食葡萄主产区GYSVd1、GYSVd2、AGVd和HSVd的分离物序列与Gen Bank已报道分离物序列一致性均超过90%。【结论】山东省鲜食葡萄主产区受到上述4种类病毒的侵染,并且在自然条件下常发生复合侵染。其中GYSVd2为山东首次报道。
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中药材五灵脂特异性PCR鉴别方法的研究
《食品与药品 》 2018
摘要：目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法。方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后扩增出一条340 bp左右条带,而其他样品在相同条件下无扩增条带,该引物的灵敏度可达4.43ng/μl。对15种市售药材的检测结果证明该方法简便可行。结论此PCR法可快速鉴别五灵脂,不受材料和干燥程度的影响,具有操作简便、快速、特异性高的优点。
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应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。
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马克斯克鲁维酵母菌的分离鉴定与所产乳糖酶酶学性能研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为研究开发具有应用价值的新型微生物资源,用邻硝基苯酚β-D-半乳糖苷(ONPG)法,从雪莲菌发酵乳中分离到一株产乳糖酶的酵母菌株XL-B36,通过分子鉴定,确定该菌为马克斯克鲁维酵母(Kluyveromyces marxianus).对该菌所产乳糖酶酶学性能进行研究,该酶最适反应温度和最适pH值分别为47℃和7. 0,在35~40℃具有良好的稳定性.pH 5. 0~8. 0表现稳定,pH 7. 0时出现酶活峰值.金属离子Mn2+、Mg2+、Na+对酶活具有激活作用,Ca2+和Zn2+对酶活具有抑制作用,Cu2+和EDTA对酶活具有完全抑制作用.
关键词： 马克斯克鲁维酵母 β-半乳糖苷酶 分子鉴定 酶学性质
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