科研产出
核桃JrCOR基因的克隆及表达分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：采用RT-PCR和RACE技术从核桃品种‘香玲’叶片中克隆了一个脱水素基因JrCOR,其全长1 156 bp,具有741 bp的开放阅读框,编码由246个氨基酸组成的多肽,具有LEA家族成员的特征多肽序列。以核桃18S rDNA为内参基因,对核桃品种‘香玲’JrCOR基因在4℃胁迫下的表达模式进行初步研究,结果表明低温诱导下叶片中JrCOR基因的表达增加,4℃处理4 h时达到最大值;自然越冬条件下,花芽中JrCOR表达量呈先上升后下降的趋势,在12月份表达量最高,推测JrCOR基因在核桃对低温胁迫响应中发挥重要功能。
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鸭肠炎病毒SORF3基因的克隆及表达载体的构建
《家禽科学 》 2018
摘要：克隆鸭病毒性肠炎病毒(Duck Enteritis Virus,DEV)SORF3基因并进行原核表达,为研究SORF3基因功能奠定基础。以DEV基因组为模板,PCR扩增SOFR3基因克隆至表达载体pET32a,构建重组表达质粒pET32a-SORF3,将重组质粒转化至感受态细胞BL21中,IPTG诱导表达并进行SDS-PAGE及Werstern-blot鉴定。结果构建的原核表达质粒pET32aSORF3转化BL21后经IPTG诱导4h,可表达分子量约50kDa融合蛋白,Western blot显示重组蛋白可以被Anti-His标签抗体识别,表明成功构建了pET32a-SORF3原核表达质粒,并能在大肠杆菌中表达具有免疫反应性的SORF3,为SORF3基因的功能研究奠定基础。
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水稻羧酸酯酶基因OsCDAP的克隆及表达分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：羧酸酯酶是一大类水解酶家族,催化短链脂肪酸酯键水解,在植物中参与除草剂代谢、信号分子激活、植物胁迫响应等过程.前期通过感染黑条矮缩病水稻数字表达谱鉴定到一个在病毒侵染后表达明显上调的羧酸酯酶基因.本研究以水稻中花11为材料克隆了该基因,将其命名为OsCDAP.生物信息学分析显示,该基因属于羧酸酯酶家族,与烟草中羧酸酯酶Nthsr203J的相似性最高,可达95%.组织表达模式分析显示,该基因在水稻茎中表达量最高,且为赤霉素诱导表达,并受赤霉素合成抑制剂PAC的抑制.该研究为进一步解析羧酸酯酶基因功能奠定了基础.
关键词： 水稻 羧酸酯酶基因 OsCDAP 同源比对 组织表达 赤霉素
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洋葱S型细胞质雄性不育相关基因的挖掘及分子标记开发
《园艺学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：以洋葱(Allium cepa L.)S型细胞质雄性不育系和保持系材料为试材,对洋葱线粒体全基因组中的58个开放阅读框(ORF)进行差异表达分析,发现了一个表达差异片段orf393。采用实时荧光定量PCR技术,利用洋葱S型细胞质雄性不育系和保持系的根,叶片,花茎以及花粉母细胞、四分体、单核花粉粒、成熟花粉粒等4个发育时期的花蕾对orf393进行时空表达分析。结果表明:orf393在洋葱S型细胞质雄性不育系的根、叶片、花茎和4个发育时期的花蕾中均有表达,尤其是在四分体时期花蕾中表达量最高,之后恢复到营养生长时期的表达水平,但在保持系中未见其表达,这表明orf393是组成型表达,可能与洋葱的花粉发育存在某种关联。利用orf393在S型细胞质雄性不育系和保持系之间的序列差异,开发了一个稳定可靠的鉴别洋葱细胞质类型的SCAR分子标记GXX393。
关键词： 洋葱 细胞质雄性不育 orf393 基因表达 分子标记
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水稻羧酸酯酶基因OsCDAP的克隆及表达分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：羧酸酯酶是一大类水解酶家族,催化短链脂肪酸酯键水解,在植物中参与除草剂代谢、信号分子激活、植物胁迫响应等过程。前期通过感染黑条矮缩病水稻数字表达谱鉴定到一个在病毒侵染后表达明显上调的羧酸酯酶基因。本研究以水稻中花11为材料克隆了该基因,将其命名为OsCDAP。生物信息学分析显示,该基因属于羧酸酯酶家族,与烟草中羧酸酯酶Nthsr203J的相似性最高,可达95%。组织表达模式分析显示,该基因在水稻茎中表达量最高,且为赤霉素诱导表达,并受赤霉素合成抑制剂PAC的抑制。该研究为进一步解析羧酸酯酶基因功能奠定了基础。
关键词： 水稻 羧酸酯酶基因 OsCDAP 同源比对 组织表达 赤霉素
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石榴3-脱氢奎尼酸合成酶基因的克隆及表达分析
《湖北农业科学 》 2018
摘要：利用RT-PCR技术从泰山红石榴(Punica granatum L.)果皮中获得3-脱氢奎尼酸合成酶(DHQS)基因cDNA序列,分析了其在不同石榴品种发育期果实中的表达情况。结果表明,DHQS基因cDNA序列长273 bp,编码91个氨基酸,编码蛋白具有典型的DHQ_Fe_ADH超家族保守结构域。该基因核苷酸序列与欧洲山毛榉、梅花和蒺藜苜蓿的相似性分别为91%、87%和88%,氨基酸序列与欧洲山毛榉、苹果、白梨和拟南芥的相似性分别为95%、92%、92%和88%。两个石榴品种发育期果皮中DHQS基因相对表达量逐渐降低,均在7月15日出现峰值。整个发育期,泰山红DHQS基因表达量高于泰山三白甜。
关键词： 石榴(Punica granatum L.) 3-脱氢奎尼酸合成酶 克隆 表达分析
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石榴PAL基因的克隆与表达分析
《核农学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：为探究石榴PAL基因的功能及表达特性,解析石榴呈色和褐变机理,以石榴品种泰山红和泰山三白甜为试材,利用RT-PCR和RACE技术克隆PAL基因全长,分析其在不同发育期的表达情况。结果表明,从泰山红果皮c DNA中克隆得到石榴PAL基因(Gen Bank登录号为KY094504)。PAL基因ORF序列长2 205 bp,编码734个氨基酸,含有典型的苯丙氨酸和组氨酸解氨酶保守结构域、PLN02457结合位点和PLN02457超家族保守结构域;石榴PAL编码蛋白的预测分子质量为79 693.87 Da,为稳定蛋白和亲水性蛋白,存在丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸3个磷酸化位点,二级结构中含有丰富的α-螺旋(47.55%)和无规则卷曲(30.52%);实时荧光定量PCR分析表明,泰山红和泰山三白甜果实发育过程中,PAL表达水平呈先降低后升高的变化趋势,泰山红果实发育各时期果皮中PAL表达水平均高于泰山三白甜;2个品种发育期果皮褐变度逐渐降低,且泰山三白甜褐变度明显高于泰山红;泰山红果实发育期果皮花青苷含量逐渐升高,泰山三白甜变化较平缓,且泰山红花青苷含量明显高于泰山三白甜。2个品种PAL基因表达量与褐变度呈显著正相关,泰山红PAL基因表达量与花青苷含量呈极显著负相关。本研究结果为揭示石榴果实呈色和褐变机理提供了理论依据。
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水稻类受体蛋白激酶FTPK1的原核表达及其活性检测
《山东农业科学 》 2018
摘要：类受体蛋白激酶(receptor-like kinase,RLKs)是植物信号分子的受体,它能够通过胞内激酶域对底物进行磷酸化或去磷酸化,从而对下游靶基因的转录及表达进行调控,参与胞内信号转导,在植物生长发育及环境应答过程中发挥作用。本研究以水稻"中花11"cDNA为模板,通过PCR技术获得类受体蛋白激酶基因FTPK1的全长序列,进一步构建原核表达载体p ET-28a-FTPK1后,经1 mmol/L IPTG诱导12 h,获得88k D的诱导表达蛋白条带,显示FTPK1可在大肠杆菌中诱导表达。表达产物经Ni柱纯化及透析后,获得纯化的融合蛋白。FTPK1激酶活力检测显示,其可磷酸化蛋白底物His和MBP,具有一定的磷酸化活性。本研究为进一步制备FTPK1特异性抗体,深入解析其理化特性及生物学功能奠定了基础。
关键词： 水稻 类受体蛋白激酶 FTPK1 原核表达 蛋白纯化 激酶活力检测
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苹果生长素响应因子(MdARF)基因克隆与表达分析
《果树学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】克隆苹果(Malus domestica‘Zihong Fuji’)MdARF基因,研究其在生长素和逆境处理下的表达特性。【方法】以‘紫弘富士’叶片c DNA为模板,采用RT-PCR技术克隆得到10个MdARF基因;运用Array技术检测MdARF在不同组织中的表达特性;运用qRT-PCR技术检测MdARF在生长素、盐和甘露醇处理条件下的表达特性。【结果】克隆得到10个MdARF基因(MdARF4-13,GenBank登录号为MG021615~MG021624),其开放阅读框分别为2 136、3 345、2 052、2 400、2 532、2 691、1 782、2 532、3 342和2 034 bp。进化分析表明,MdARF3/7属于AtARF3/4-like,MdARF4/10属于AtARF10/16/17-like,MdARF1/6/11/13属于AtARF1/2-like,MdARF5/9/12属于AtARF5/7/19-like,MdARF2/8属于AtARF6/8-like。亚细胞定位预测分析表明,10个MdARF蛋白均定位于细胞核。MR结构域氨基酸组成预测分析表明,MdARF2/5/8/9/12可能为转录激活子,MdARF1/3/4/6/7/10/11/13可能为转录抑制子。Array结果显示,MdARF在被检测的组织中均有表达。在IAA处理条件下,MdARF1/7/9/10转录水平受到诱导,MdARF2/3/4/6/8/11/12转录水平降低;在盐处理条件下,MdARF9转录水平受到诱导,而MdARF1/5/7/10/12/13转录水平下调;在甘露醇处理条件下,MdARF6/9转录水平受到诱导。【结论】克隆得到10个MdARF基因,其表达水平受IAA、盐或甘露醇诱导或者下调,可能参与调控生长素信号转导以及逆境响应等过程。
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玉米ZmC3H18基因的序列及表达分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：CCCH型锌指蛋白是锌指蛋白超家族的一个亚家族,一般包含1~6个由三个半胱氨酸和一个组氨酸组成的基序,在植物的生长发育和非生物胁迫过程中均发挥重要的调控作用。本研究中,我们对CCCH型锌指蛋白基因ZmC3H18的序列及表达进行了分析。ZmC3H18蛋白包含2个CCCH结构域,系统进化树分析表明ZmC3H18与单子叶植物中同源基因的进化关系更近。ZmC3H18基因在组织器官中呈组成型表达,但是在生殖器官中的表达量高于在营养器官中的表达量。ZmC3H18基因在气生根中的表达模式显示该基因在气生根原基起始过程中表达量最高。此外,顺式作用元件分析显示ZmC3H18基因的启动子区含有响应冷、热和干旱胁迫的顺式作用元件。实时定量PCR分析显示ZmC3H18基因的表达受非生物胁迫(冷、热、盐和干旱)调控。这些表达结果显示ZmC3H18基因在生殖生长和非生物胁迫过程中均发挥重要作用。本试验结果将为玉米ZmC3H18基因的功能研究提供重要信息。
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