科研产出
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6基因克隆及双基因真核表达载体的构建
《山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集 》 2007 CSCD
摘要：根据哺乳动物细胞真核表达载体pIRESMCSAMCSB多克隆位点的序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF50RF6基因阅读框架,并在基因起始密码子前面加入Kozak序列,分别设计了针对ORF50RF6的引物P5s/P5r,P6s/P6r。以病毒细胞培养物为模板,经RT-PCR扩增得到ORF50RF6基因,ORF50RF6PCR产物和pIRES分别经双酶切,连接构建pIRES-ORF50RF6．经PCR、双酶切鉴定和测序证明成功构建了转移载体pIRES-ORF50RF6。测得的ORF50RF6序列与VR-2332株的氨基酸同源性分别为99%和100%,仍属...
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6基因 转移栽体
猪繁殖与呼吸综合征病毒山东株的分离鉴定
《莱阳农学院学报 》 2006 CSCD
摘要：在对山东省某规模化养猪场进行的繁殖障碍病血清学调查中检测到猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体阳性猪,从中分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),并进行了初步鉴定。结果表明分离毒株能在HS.2H细胞上增殖产生细胞病变,经美洲型标准株PRRSV VR-2332阳性血清进行间接免疫荧光试验结果呈阳性反应,透射电镜可观察到直径60~70nm的病毒粒子,有囊膜。用针对PRRSV VR-2332的PCR引物对分离病毒进行RT-PCR扩增,检测结果阳性。将病毒接种血清阴性仔猪,检测到血清中出现病毒特异性抗体,但未见临床症状及明显的病理变化,将分离株命名为PRRSV SD株。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD株 分离鉴定
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6双基因真核表达载体在哺乳动物细胞中的表达
《病毒学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：为了实现猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的ORF5和ORF6基因在同一质粒中分别表达各自编码的蛋白,发挥E蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势,将构建成功的pIRES-ORF5/ORF6转移载体用脂质体法转入稳定表达的细胞CHO,经G418加压筛选获得具稳定表达的细胞株。以RT-PCR、SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果表明:RT-PCR检测到两种目的基因的转录;SDS-PAGE和West-ern blot检测到同时表达的两种目的蛋白;间接免疫荧光检测到目的蛋白得到表达。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6 CHO 蛋白的表达
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PCV-2 ORF2和PRRSV ORF5基因的扩增与双基因真核表达载体的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型ORF2基因序列和猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因序列,分别设计一对引物,应用PCR和RT-PCR扩增出PCV-2 ORF2基因和PRRSV ORF5基因。将PCR产物ORF2经NheⅠ/EcoRⅠ双酶切回收后插入真核表达载体pIRES得到pIRES-ORF2,RT-PCR产物ORF5经NotⅠ/XbaⅠ双酶切回收后插入pIRES-ORF2构建重组质粒pIRES-ORF2/ORF5。对此质粒中的插入片段,进行PCR RT-PCR及双酶切鉴定,同时对插入序列进行测序分析,表明SD1株ORF2与国内多种毒株的同源性为99%,pIRES-ORF2ORF5转移载体ORF5基因的核苷酸推导氨基酸与北美洲原型(VR-2332株)氨基酸同源性为99%。此重组表达载体的成功构建,为进一步研究PCV-2 ORF2及PRRSV ORF5编码蛋白的生物学活性及研究猪圆环病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒二联核酸疫苗奠定了基础。
关键词： 猪圆环病毒2型 ORF2 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5 真核表达载体
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美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位基因表达及其产物的纯化
《动物医学进展 》 2006
摘要：对原核中以包涵体形式高效表达的美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位区段进行了变性、复性与纯化研究。将美洲型PRRSV重组质粒pGEX-6P-1-N转化入E.coliBL21(DE3)细胞中,成功表达了重组蛋白GST-N,超声裂解复性后目的蛋白经GSTrap FF纯化试剂盒纯化后,纯度可达90%以上。将欧洲型PRRSV重组质粒PQE30-N转化入E.coliM15细胞中表达了重组蛋白His-N。超声裂解后目的蛋白经HisTrapHP蛋白纯化试剂盒纯化后,纯度可达95%以上。Western blot结果表明,两种蛋白分别被美洲型和欧洲型PRRSV阳性血清识别。纯化出的大量美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位区段,为PRRSV的鉴别诊断提供了抗原基础。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型 欧洲型 N蛋白抗原多肽 原核表达 纯化
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细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响
《山东农业科学 》 2002
摘要：猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)仍然是危害世界养猪业的主要疾病之一,严重制约着养猪业的发展。PRRSV的增殖受到多重因素的影响,其中细胞培养是PRRSV增殖的基础。通过实验探讨血清浓度、培养基pH值、细胞密度对PRRSV-SD滴度的影响,筛选出最佳培养条件,为PRRS疫苗研制打下良好基础。
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