科研产出
肉牛肌肉细胞的分离培养和鉴定及其氧化应激模型的建立
《动物营养学报 》 2020 北大核心 CSCD
摘要：本研究采用组织块法分离培养获得肉牛肌肉细胞并进行鉴定,利用过氧化氢(H2O2)构建氧化应激模型,为深入研究氧化应激对肉牛肌肉生长发育和肉品质的影响机制提供技术支撑.选用体重为252 kg的利鲁(利木赞×鲁西黄牛)杂交公牛背最长肌,利用组织块培养法分离培养肌肉细胞.通过形态学观察、免疫荧光法及流式细胞仪等手段对细胞进行鉴定.采用不同浓度(0、50、100、150、200、250、300、350、400、450μmol/L)的H2O2处理细胞24 h,通过观察细胞形态、检测细胞存活率及氧化还原状态,筛选适宜作用浓度.然后利用该浓度H2O2处理细胞不同时间(0、0.75、1.5、3、6、12、24 h),通过分析确定适宜作用时间.结果表明:1)分离获得的细胞长势良好,形状细长,呈纺锤体形和梭形.免疫荧光法和流式细胞仪鉴定肌肉细胞的特异性蛋白(生肌决定因子1和配对盒基因7)均得到较高表达.2)视野内细胞数量随H2O2浓度升高逐渐减少,至450μmol/L时,细胞发生明显死亡现象.细胞存活率随H2O2浓度的升高显著降低,与0浓度H202处理相比,300μmol/L时降至65.4%(P<0.05),450μmol/L时仅为6.7%(P<0.05).细胞活性氧(ROS)水平先略微降低后逐渐升高(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性先升高后逐渐降低(P<0.05),丙二醛(MDA)和蛋白质羰基(PC)含量逐渐升高(P<0.05),8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)含量先升高后降低(P<0.05).3)细胞存活率随300μmol/L H2O2处理时间的延长逐渐降低,与0 h相比,6 h降至61.2%(P<0.05),12 h降至47.4%(P<0.05),但在24 h时略有升高(P<0.05).随着处理时间的延长,细胞ROS水平先升高后逐渐降低(P<0.05),SOD和CAT活性先升高后降低(P<0.05),MDA、PC和8-OHdG含量均逐渐升高(P<0.05).综上所述,本研究通过组织块培养法分离培养获得较高纯度的肉牛肌肉细胞,并成功构建氧化应激模型,H2O2的适宜作用浓度和时间分别为300μmol/L和6 h.
关键词： 肉牛 肌肉细胞 细胞培养 细胞鉴定 过氧化氢 氧化应激模型
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血清浓度对心肌细胞自噬的影响
《滨州医学院学报 》 2015
摘要：目的观察不同血清浓度对心肌细胞自噬的影响。方法以大鼠胚胎心肌细胞系H9c2为标本,建立3个时间点6、12、24h,以及四个不同浓度0、2、5、10%来检测细胞的自噬程度。运用Western Blot检测心肌细胞LC3Ⅱ、P62的变化,吖啶橙染色检测酸性膜泡。结果培养6h之前,较高浓度10%血清自噬程度最低,6~12h随着血清浓度增高自噬被促进。24h后去血清组促进自噬,添加2,5,10%血清均能抑制自噬。结论在筛选促进自噬的因子时,应选择背景自噬较低的模型,作用效果在6h之内的因子首选10%血清培养的心肌细胞,作用效果在6~12h之间的选择无血清培养体系,作用效果在24h之后的可选择有血清培养体系。
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转鲑鱼降钙素基因酵母对体外培养破骨细胞的影响
《山东农业科学 》 2011
摘要：用机械分离的方法获得新生Wistar大鼠的破骨细胞,在培养液中分别加入经肠激酶酶切的转鲑鱼降钙素基因酵母的上清液和密钙息(Miacalcic,鲑鱼降钙素注射液),以HE染色观察破骨细胞形态,Image-Pro Plus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的面积,骨片培养7天,吸收陷窝结果显示,转鲑鱼降钙素对破骨细胞吸收功能具有明显的抑制作用。
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细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响
《山东农业科学 》 2002
摘要：猪繁殖与呼吸综合症(PRRS)仍然是危害世界养猪业的主要疾病之一,严重制约着养猪业的发展。PRRSV的增殖受到多重因素的影响,其中细胞培养是PRRSV增殖的基础。通过实验探讨血清浓度、培养基pH值、细胞密度对PRRSV-SD滴度的影响,筛选出最佳培养条件,为PRRS疫苗研制打下良好基础。
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