科研产出
山羊转基因克隆胚在体内和体外发育的研究
《江西农业学报 》 2010
摘要：探讨了体内/外成熟卵母细胞、体内/外培养系统、输卵管液和输卵管上皮细胞共培养系统对转基因克隆胚发育的影响。结果表明:体内/外成熟卵母细胞对转基因克隆胚各阶段发育率无显著影响。体内/外培养系统中,转基因克隆胚2～3-细胞、4-细胞、8-细胞发育率差异不显著;16-细胞和桑/囊胚发育率差异显著。对照组和20%输卵管液中,转基因克隆胚2～3-细胞、4-细胞、8-细胞发育率均显著高于50%输卵管液;在20%输卵管液中16-细胞的发育率显著高于对照组和50%输卵管液。转基因克隆胚在输卵管上皮细胞共培养系统和SOF培养系统中培养,2～3-细胞和4-细胞发育率无显著差异;8-细胞、16-细胞和桑/囊胚的发育率差异显著。
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羊白细胞介素-18成熟蛋白的酵母表达和生物学活性研究
《中国预防兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了研究重组羊白细胞介素(gIL)-18在酵母系统中的高效表达,进一步阐明该重组蛋白的生物学活性,以含有gIL-18基因的重组质粒为模板进行PCR扩增,构建重组表达质粒pPICZ-gIL-18,转化于毕赤酵母GS115,以甲醇诱导表达,经SDS-PAGE和western blot分析证实了重组蛋白的表达,分泌的重组gIL-18表达量为100mg/L。经纯化后用MTT法和MDBK-VSV法检测表达的重组IL-18体外生物活性,利用免疫试验检测了重组蛋白对羊痘疫苗的免疫增强作用。实验结果表明,该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性,比活性为1.5×105u/mg。体外具有增强羊痘疫苗的活性。毕赤酵母分泌表达的重组gIL-18具有良好的生物学活性,为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的大规模应用奠定了基础。
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体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞孤雌激活及发育的影响
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：探讨了体外培养时间和培养系统对山羊卵母细胞孤雌激活和体外发育的影响。结果表明:卵母细胞体外培养36、33、30和27 h活化率极显著高于18、21、24 h(P<0.01),体外培养24和21 h活化率显著高于18h(P<0.05)。2-4-细胞卵裂率,27、30和33 h极显著高于18 h(P<0.01),显著高于21 h(P<0.05)。大于4-细胞发育率24、27和30 h极显著高于21、33和36 h(P<0.01)。大于8-cell的发育率,24、27和30 h极显著高于21h(P<0.01)。24和27 h大于16-细胞的发育率极显著高于30h(P<0.01)。孤雌胚在TCM199和SOF中大于4-细胞发育率显著(P<0.05)低于颗粒细胞共培养系统,极显著低于(P<0.01)输卵管上皮细胞共培养系统。孤雌胚在颗粒细胞共培养系统中大于8-细胞和大于16-细胞发育率显著低于(P<0.05)输卵管上皮细胞共培养系统。
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培养时间和传代次数对山羊输卵管上皮细胞周期和凋亡的影响
《解剖学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的 利用山羊输卵管上皮细胞(OECS)探讨体外培养时间和传代次数对细胞生长的影响.方法 建立山羊OECS的体外培养体系,用流式细胞术分别对半数贴壁、刚贴满(贴壁1D)、贴满3D和贴满5D,以及原代、Ⅲ代和Ⅴ代细胞分别进行细胞周期和凋亡检测.结果细胞贴满3D和传至Ⅲ代时,细胞凋亡比率较低,处于静止期(G0/G1)细胞明显降低,极性线粒体受损明显降低;培养时间延长和传代次数增加后,凋亡比率显著升高,处于增殖期(S,G2/M)的比率显著降低,极性线粒体受损明显升高.结论采用OECS培养胚胎时,细胞应控制在Ⅲ代以内,且贴满时间不超过3D.
关键词： 输卵管上皮细胞 培养时间 传代 细胞周期 流式细胞术 山羊
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山羊EST资源的SSR分析
《山东农业科学 》 2009
摘要：为充分利用现有数据库中的EST资源开发山羊的分子标记,以期为研究山羊的遗传多样性和利用分子标记辅助选育山羊品种奠定基础,对NCBI dbEST数据库中13 497个EST进行聚类分析,获得1 999个Contig和5 182个singlets,利用软件MISA对此7 181个uni-EST进行SSR分析,共发现483个EST-SSR,出现频率为6.73%,平均每10 kb就出现一个SSR,这些SSR的长度介于12~174 bp之间,平均长度为20.46bp,其中二核苷酸和三核苷酸SSR是主要的重复类型,占所有EST-SSR的81.99%。山羊EST-SSR一共有59种重复基元,其中出现最多的是AC/GT,占所有EST-SSR的21.5%。表明山羊EST-SSR出现频率高、种类丰富,而且58%的含有SSR的EST编码已知功能的蛋白,具有较高的应用价值。
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C/C+HA骨植入材料对杂交波尔山羊生理生化机能的影响
《山东大学学报(工学版) 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：碳/碳复合材料+羟基磷灰石涂层(C/C+HA)骨植入材料具有与人体骨组织十分接近的弹性模量和优良的表面生物活性,是一种具有重要临床应用价值的骨替换材料.采用杂交波尔山羊作为动物实验模型,开展了C/C+HA复合材料骨内植入实验,并从呼吸、心跳、消化、血液和免疫等方面考察了该植入材料对实验动物生理、生化指标的影响,进而探讨了该材料的生物安全性.结果表明:在植入手术后61 d的观察期内,虽然实验动物出现轻度贫血和消化吸收功能下降,但未发现C/C+HA复合材料引起的热源性反应、急性感染和免疫功能下降,说明该材料具有较好的生物安全性.
关键词： C/C+HA复合材料 山羊 生理指标 生化指标
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山羊卵母细胞孤雌激活和孤雌胚体外发育的研究
《吉林农业大学学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：用离子霉素、乙醇、电刺激和Ca-A23187对体外成熟山羊卵泡卵母细胞的孤雌激活和孤雌胚体外发育进行了较为系统的研究。结果表明:2.5,5.0,10.0μmol/L离子霉素对卵母细胞激活率分别为54.0%,58.2%,57.9%,孤雌胚发育率分别为1.5%,3.4%,0%,激活率和发育率均无显著差异(P>0.05)。5.0,10.0,15.0,20.0μmol/L Ca-A23187对卵母细胞激活率分别为31.0%,46.4%,41.8%,45.8%,其中5.0μmol/L Ca-A23187激活率显著低于其他处理组(P<0.05)。5.0μmol/L处理大于4-细胞发育率,极显著低于10.0μmol/L和20.0μmol/L处理(P<0.01),显著低于15.0μmol/L处理(P<0.05)。3%,7%,11%和15%乙醇对卵母细胞激活率分别为40.0%、61.4%、63.0%和67.9%,其中3%乙醇活化率极显著低于其他各组(P<0.01)。15%乙醇致卵母细胞死亡率为15.4%,显著高于其他各组(P<0.05)。7%和11%乙醇处理2~4-细胞和大于4-细胞的发育率,均显著高于3%和15%乙醇处理(P<0.05)。15%乙醇处理大于8-细胞的发育率,极显著低于7%乙醇(P<0.01),显著低于11%乙醇(P<0.05)。在含Ca2+电激液中,用1.00,1.25,1.50,1.80 kV/cm电压刺激卵母细胞,活化率分别为48.4%,54.3%,55.8%,45.1%,2~4细胞卵裂率分别为52.3%,57.9%,54.7%,53.1%,差异均不显著(P<0.05)。
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颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响
《山东农业科学 》 2006
摘要：试验系统研究了颗粒细胞对山羊卵泡卵母细胞体外成熟和体外受精的影响。COCs、机械裸卵和自然裸卵的体外成熟率分别为68.3%、45.6%和6.1%,组间差异显著(P<0.05),卵裂率分别为41.5%、8.1%和0,差异显著(P<0.05)。对照组和15×104个/ml、150×104个/ml颗粒细胞组卵母细胞体外成熟率分别为65.9%、60.2%和64.6%,无显著差异(P>0.05),但均显著高于1 500×104个/ml(50.0%)和1.5×108个/ml(30.3%)颗粒细胞组(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系统卵母细胞成熟率为75.8%,显著高于150×104个/ml颗粒细胞条件培养液组(63.4%)和M199培养液组(66.7%)(P<0.05)。颗粒细胞单层共培养系卵裂率为50.0%,显著高于150×104个/ml条件培养液组(36.7%)和M199培养液组(38.2%)(P<0.05)。
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