科研产出
含CpG序列PRRSV ORF5基因真核表达质粒在小鼠的细胞免疫应答
《中国兽医学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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含CpG序列PRRSV ORF5重组质粒在小鼠细胞中的免疫
《西北农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,将成功构建含CpG序列PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5免疫SPF小鼠,检测小鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。结果表明,构建的含CpG序列真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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PRRSV SX-1株的分离与NSP2和ORF5基因的克隆及变异分析
《家畜生态学报 》 2009
摘要：从山东莘县恒顺猪场发病猪群中分离到PRRSV病毒(SX-1株)。用RT-PCR法对该分离株的NSP2和ORF5基因进行了扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV SX-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与JXA1毒株相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.8%、94.9%、88.9%,氨基酸同源性分别为99.0%、93%、87.5%。基因系统发育树分析结果显示,SX-1与JXA1、HUN株的亲缘关系很近,与CH-1a亲缘关系较近,与VR2332、CC-1、RespPRRS/ReproMLV等毒株处于不同分支。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 NSP2基因 ORF5基因 变异分析
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斑点杂交法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒
《中国动物检疫 》 2009
摘要：斑点杂交技术是一种快速、稳定、高通量的检测方法,在动物疫病的诊断和流行病学调查中发挥着重要作用。在本研究中,通过RT-PCR扩增出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD1株ORF7基因,并以其为模板,制备地高辛标记cDNA探针,并进行了特异性和敏感性检测。利用该探针对50份临床病料进行PRRSV检测,并与RT-PCR进行了比较,结果显示,斑点杂交结果与RT-PCR结果完全一致,探针敏感性和特异性亦较高,说明本研究建立的斑点杂交方法可用于PRRSV临床检测与免疫监测。
关键词： 地高辛标记探针 斑点杂交 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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山东PRRSV流行株ORF5、ORF6、ORF7基因序列的分子特征
《家畜生态学报 》 2009
摘要：采用RT-PCR技术对2001~2007年分离自山东地区10株(ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行ORF5、ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,与已知序列的毒株的相应片段进行同源性分析比较,并对其分子特征进行分析。结果表明:该10株病毒仍属北美洲型,其中2001~2002年分离的SD1株、SD2株和2006年分离的SD6株核苷酸序列之间的ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为99.2%,99.8%,100%,均与北美洲原型代表株(VR-2332株)和疫苗毒MLVRe-spPRRS Repro USA遗传距离较近,同属一大分支;2006~2007年分离的PRRSV ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD3,SD4,SD5,SD7分离株ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为97.8%~100%,99.4%~99.8%,99.2%~99.7%,均与国内96年Ch-1a和2002年HB-1株及2006年分离鉴定的国内高致病性分离株(JXA1、Shanghai、HEB1)同属一个大的分支。首次证实目前山东省同时存在高致病性PRRSV和传统PRRSV,并且有由传统PRRSV向高致病性PRRSV演化的趋势。
关键词： PRRSV 高致病性PRRSV ORF5 ORF6 ORF7 克隆 分子特征
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒对猪体免疫作用研究
《中国免疫学杂志 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：目的:为了增强猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)DNA疫苗免疫效力,以pVAX1为真核表达载体,以PRRSV ORF5基因为目的基因,构建了含有CpG和PRRSV ORF5的真核表达质粒CpG-pVAX1-ORF5,并在猪体进行了免疫试验。方法:检测猪PRRSV的特异性抗体滴度、IL-2水平以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平,并做了攻毒保护试验。结果:试验结果表明本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫(显著的淋巴细胞增殖反应水平)。攻毒结果表明CpG-pVAX1-ORF5组能够有效地抵抗经鼻攻毒,可以保护猪轻微病毒血症,比对照组减少80%,也不表现临床症状,对肺的损害能提供部分保护。结论:CpG的加入可使免疫猪的病变减轻或消失。从而表明含有CpG-ODN能作为PRRSVDNA疫苗的有效佐剂。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 CpG DNA免疫
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CpG-pVAX1-ORF5真核重组表达质粒小鼠细胞免疫的研究
《青岛农业大学学报(自然科学版) 》 2008
摘要：为了提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSV ORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSV GP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。试验结果表明,本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的细胞免疫。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 细胞免疫应答
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乳猪“高热症”猪繁殖与呼吸综合征病毒的分离与致病性分析
《中国预防兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：本研究针对疑似高热症疫情的猪场,从分离病原的致病特性及基因特征,对高热症的病因进行了探索。以RT-PCR/PCR从临床病料中检测出猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)核酸,利用Marc-145细胞从病料中分离到PRRSV(XS070425毒株)。测序结果显示,XS070425毒株Nsp2基因无高致病性PRRSV Nsp2基因533～561位连续29个氨基酸"RPVTPLSEPIPVPAPRRKFQQVKRLSSAA"的缺失;但遗传进化分析显示,XS070425毒株Nsp2、ORF5基因与近期我国报道的高致病性PRRSV-HuN4和JXA1有较高的同源性,达95%～96%。致病性试验显示,PRRSV-XS070425原始病料悬液和Marc-145细胞分离物接种健康猪后,病毒血症可持续26d,并出现典型的PRRS临床症状和体温升高,但不致死感染猪。这些结果说明,无NSP2蛋白29个氨基酸残基缺失的PRRSV也是猪高热症的重要病原。
关键词： 猪高热症 猪繁殖与呼吸综合征病毒 致病性
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含CpG序列PRRSV ORF5基因真核质粒构建及其免疫原性的研究
《中国农业科学 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：【目的】提高猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)基因免疫的效果,构建含CpG基序和PRRSVORF5的真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5。【方法】经酶切鉴定和序列测定,将重组质粒转染COS-7细胞,经间接免疫荧光试验证实CpG-pVAX1-ORF5可表达PRRSVGP5蛋白。免疫SPF小鼠,检测鼠的特异性抗体滴度、脾T淋巴细胞亚群数量(CD4+和CD8+)以及淋巴细胞增殖反应(MTT法)水平。【结果】本试验构建的含CpG基序真核重组表达质粒CpG-pVAX1-ORF5能诱导小鼠产生针对PRRSV的体液免疫与细胞免疫。【结论】CpG-ODN可提高PRRSV基因疫苗的免疫效果。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因 DNA免疫
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猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)SD2株ORF5/ORF6双基因真核表达载体在哺乳动物细胞中的表达
《山东畜牧兽医学会养猪专业委员会第一届学术研讨会论文集 》 2007 CSCD
摘要：为了实现猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的ORF5和ORF6基因在同一质粒中分别表达各自编码的蛋白,发挥E蛋白的病毒中和优势和M蛋白的细胞免疫优势,将构建成功的pIRES-ORF5/ORF6转移载体用脂质体法转入稳定表达的细胞CHO,经G418加压筛选获得稳定表达的细胞株,以RT-PCR、SDS-PAGE、Westernblot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达情况。结果表明：RT-PCR检测到两种目的基因的转录；SDS-PAGE检测到同时表达的两种目的蛋白；间接免疫荧光检测到目的蛋白得到表达．Westernblot证实表达的两种蛋白具有免疫活性,为PRRS亚...
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 SD2株 ORF5/ORF6 CHO 蛋白的表达
