科研产出
鹅星状病毒LAMP快速检测方法的建立与应用
《中国预防兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：鹅星状病毒是一种新发的可导致雏鹅以痛风为主要特征的传染性病原。为建立鹅星状病毒(AstV)的快速检测方法,本研究根据鹅Ast V ORF1b基因的保守序列设计了一组特异性的LAMP引物,建立鹅AstV的LAMP快速检测方法,并检测其特异性和灵敏度。结果显示:建立的LAMP方法的最佳反应温度为64℃;仅能扩增鹅Ast V,而对鹅细小病毒、鹅副黏病毒、鸭坦布苏病毒及鹅源H9N2亚型禽流感病毒均不能扩增;能够检测到的最低模板(cDNA)浓度为1 ng/μL,因此该方法具有较好的特异性和敏感性。临床样品检测结果显示:建立的LAMP方法与RT-PCR方法阳性符合率为95.65%。综上,本研究建立的LAMP方法能够特异、快速地检测新发鹅Ast V,为养殖基地、科研和检验检疫部门提供了一种快速检测该病原的技术手段。
全文链接
请求原文
β-胡萝卜素-15,15′-加氧酶在利鲁牛各组织部位的表达
《山东农业科学 》 2019
摘要：本试验以利鲁牛(利木赞牛×鲁西黄牛)为研究对象,通过免疫组织化学、蛋白质印迹法(Western blot)和荧光定量PCR等分子手段检测了BCMO1在利鲁牛肝脏、十二指肠、不同脂肪组织等部位的表达。免疫组织化学和Western Blot检测结果均显示,BCMO1在肝脏、十二指肠、心脏、肾脏和肺脏中具有较高的表达量,在脾和瘤胃内未表达;不同部位脂肪组织内BCMO1相对表达量差异较大,其中在Western Blot检测中BCMO1在皮下脂肪仅有极少量表达,但免疫组织化学结果显示BCMO1在不同脂肪组织中的表达量相当。荧光定量PCR检测结果显示,BCMO1除在十二指肠具有极高的表达量外,在肾脏、心脏、牛皮的表达量均高于肝脏。以上结果对深入研究β-胡萝卜素在肉牛体内的代谢机制提供了科学支撑。
关键词： 利鲁牛 β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶 免疫组织化学 蛋白质印迹法 荧光定量PCR 表达量
全文链接
请求原文
基于荧光定量PCR法的鸡传染性支气管炎疫苗免疫效果评价研究
《山东农业科学 》 2019
摘要：采用鸡胚传代致弱法得到一株可用于鸡传染性支气管炎疫苗的候选毒株,同时设定一个商品疫苗作为对照,采用荧光定量PCR法评价疫苗的免疫效果。结果表明,攻毒后7 d,两组试验鸡多数脏器均能检测到弱毒,部分脏器检测不到强毒,说明致弱毒株候选疫苗和商品疫苗对试验鸡有很好的保护作用。
全文链接
请求原文
鸡传染性支气管炎病毒M41株的致病性及排毒规律
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：本试验针对鸡传染性支气管炎病毒(IBV)呼吸型M41标准株的S1基因设计并合成引物,构建了阳性质粒标准品;经过不断优化建立了检测IBV-M41 SYBR GreenⅠReal-Time PCR标准曲线。通过对8日龄SPF鸡人工感染IBV-M41发病,采用Real-Time PCR方法跟踪检测其泄殖腔排毒情况;剖检并采集试验鸡的相关器官制作病理切片;在临床观察的基础上记录试验鸡的体质量、体温等指标。结果显示,所建立的检测方法重复性好,特异性高,最低可检测到28.3拷贝/μL的病毒核酸。人工感染病毒3～15 d后在鸡的排泄物中均检测到了病毒;攻毒组鸡临床症状明显,相关组织器官均呈现不同程度的病变。该病毒致病性试验、排毒规律和real-time PCR检测方法的建立,为IBV感染鸡作为实验动物模型进行相关药物的临床药效评价提供方法与依据。
关键词： real-time PCR 鸡传染性支气管炎病毒 IBV-M41 病理变化 排毒规律
全文链接
请求原文
禽腺病毒4型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立
《畜牧与兽医 》 2019 北大核心
摘要：禽腺病毒4型(FAdV-4)是心包积水综合征的重要病原。本研究拟建立FAdV4荧光定量PCR检测方法,为FAdV4感染的流行病学调查、早期诊断、疫病净化提供技术手段。根据GenBank中的禽腺病毒4型六邻体(hexon)基因序列,设计一对引物,扩增hexon基因,将目的基因与载体pEASY-T3连接,构建重组阳性质粒pEAST-T3-H,利用所制备的质粒pEAST-T3-H为模板,对PCR反应体系、反应条件进行优化。建立了禽腺病毒4型SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,检出的标准品的敏感性为1.7×10拷贝/μL,优于常规的PCR检测方法。该方法与其他禽病病毒均无交叉反应。表明该方法具有特异型强、灵敏度高、重复性好的特点,可用于临床样本的检测。
全文链接
请求原文
IP-10作为牛结核病诊断标志物的初步探究
《中国兽药杂志 》 2018 北大核心
摘要：为评价细胞因子IL-12 p40、IP-10和TNF-α转录水平与牛分枝杆菌感染之间的关系,及其在牛结核病诊断中的应用潜力。采集田间筛选的结核病阳性牛、结核病阴性牛以及牛分枝杆菌68002人工感染牛的外周血淋巴细胞,经牛结核菌素(PPDB)、重组蛋白CFP-10-ESAT-6(CE)、MPT63、PET和PBS分别刺激6 h,提取细胞总RNA,用荧光定量PCR检测IL-12 p40、IP-10、IFN-γ和TNF-α的转录水平。结果显示结核病阳性牛的外周血淋巴细胞经PPDB和CE刺激后,其IP-10的m RNA转录水平显著高于结核病阴性牛,且与IFN-γ的m RNA转录水平具有良好的相关性;初步建立牛结核病IFN-γ和IP-10的Real-time PCR检测方法,其对临床阳性样本的检出率分别为71.45%和78.57%。因此,IP-10的m RNA转录水平与牛分枝杆菌的感染相关,有作为牛结核病诊断标志物的潜力。
关键词： 牛结核病 诊断 IP-10 IFN-γ Real-Time PCR
全文链接
请求原文
大灰象甲实时定量PCR内参基因的筛选
《昆虫学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：【目的】筛选出适合分析大灰象甲Sympiezomias velatus成虫不同组织中基因表达水平的内参基因。【方法】利用转录组测序技术获得大灰象甲管家基因序列作为候选内参基因,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术分析候选基因在大灰象甲雌雄成虫触角、头、胸、腹和足中的表达量;并利用geNorm, NormFinder和BestKeeper软件及在线工具RefFinder评价候选基因的表达稳定性。以大灰象甲气味结合蛋白1(odorant bindng protein 1, OBP1)基因为目标基因验证候选基因在大灰象甲成虫不同组织中的表达稳定性。【结果】基于大灰象甲转录组数据首次鉴定得到β-肌动蛋白基因(ACT)、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因(GAPDH)、18S核糖体RNA基因(18S rRNA)、60S核糖体蛋白L12基因(RPL12)、60S核糖体蛋白L32基因(RPL32)、40S核糖体蛋白S20基因(RPS20)、延伸因子2基因(EF2)、α-微管蛋白基因(TUA)和β-微管蛋白基因(TUB)共9个管家基因序列。geNorm分析结果显示,RPL12和RPS20是最稳定表达的内参基因,而BestKeeper和NormFinder分析结果显示最稳定表达的内参基因分别是TUA和TUB。综合各分析方法得出9个候选基因中TUB,TUA,RPS20和RPL12是最稳定表达的内参基因,而18S rRNA,ACT和GAPDH这3个广泛应用的内参基因则表现出最低的表达稳定性。最后以OBP1为目标基因对稳定性不同的4个候选基因进行稳定性验证,发现以TUB和RPL12为内参基因,OBP1在成虫不同组织之间的表达模式基本一致;而以RPL32为内参基因,表达模式与应用TUB作为内参基因时稍有不同,使用18S rRNA作为内参基因得到的OBP1表达模式则与应用TUB作为内参基因时的完全不一致。【结论】TUB,TUA,RPS20和RPL12可以作为分析大灰象甲成虫不同组织中基因表达水平的内参基因,为后续基因表达研究奠定了基础。
关键词： 大灰象甲 实时定量PCR 内参基因 基因表达分析 表达稳定性
全文链接
请求原文
3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014—2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率。结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株。通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%。本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考。
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
全文链接
请求原文
3株传染性法氏囊病病毒的分离与鉴定
《山东农业科学 》 2018
摘要：本研究于2014-2017年从山东省发生传染性法氏囊病的鸡群中分离到3株传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)毒株,通过RT-PCR技术对3株分离毒株进行鉴定,并测定其ELD50以及对3周龄SPF鸡的致死率.结果如下:3株传染性法氏囊病病毒分离株均可导致70%以上SPF鸡的死亡,属于强毒株.通过特异性引物对3株分离株VP2基因的高变区进行扩增并测序,序列分析结果显示:3株分离株与5个超强毒株均在同一个大的分支上,同源性在96. 3%~99. 3%之间;与疫苗株B87和D78分属于两个分支,同源性仅为88. 7%~90. 6%.本研究为山东地区传染性法氏囊病的防治提供了有益参考.
关键词： 传染性法氏囊病病毒 分离与鉴定 RT-PCR VP2
全文链接
请求原文
小麦春化作用相关基因的时空表达特性研究
《分子植物育种 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：为明确普通小麦春化基因的时空表达特性,以强冬性品种济麦19、冬性品种钱交麦、半冬性品种泰山1号、偏春性品种济麦20和春性品种中国春为实验材料,利用q RT-PCR技术,分析了VERNALIZATION1(Vrn1)、VERNALIZATION2(Vrn2)和VERNALIZATION3(Vrn3)的时空表达特性。结果表明在普通小麦中,Vrn1基因在四类小麦的表达量由高至低为幼穗、旗叶、普通叶片、茎秆。未春化时,冬性越强的品种,Vrn1、Vrn3基因的起始表达量越低,Vrn2基因的起始表达量越高。随着春化过程的进行,Vrn1和Vrn3基因上调表达,并在春化25 d时出现表达加速上调现象;Vrn2基因下调表达。小麦冬性越强,Vrn基因表达量变化越明显。在脱春化过程中,随着高温时间的增加,Vrn和Vrn3基因下调表达,Vrn2基因表达变化不明显。该结果为进一步分析普通小麦春化发育的分子调控机理提供了重要信息。
全文链接
请求原文
