科研产出
棉花转录因子GhSNAC3启动子的克隆与表达分析
《华北农学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究棉花NAC转录因子基因GhSNAC3启动子的结构和功能,以鲁棉研32号基因组为模板,用PCR扩增的方法得到棉花基因GhSNAC3的启动子序列,利用分析网站PlantCARE、PLACER和BDGP对启动子上存在的顺式作用元件进行了预测与分析,在此基础上利用该启动子及GhSNAC3基因构建植物表达载体,并通过烟草遗传转化进一步研究启动子的转录活性。结果表明GhSNAC3启动子除含有CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有茉莉酸、赤霉素和脱落酸响应元件以及大量光顺式作用元件和逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件。采用不同胁迫处理转基因烟草并进行表达分析,结果显示GhSNAC3在盐胁迫下植株根部有高水平的表达,而在茎和叶中表达量极低,表明GhSNAC3在逆境胁迫应答过程中可能具有重要功能,其启动子是一个盐诱导型启动子,具有组织特异性。研究结果为棉花NAC信号通路研究和耐盐基因工程改良提供了理论依据。
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花生质体型酰基载体蛋白基因5′侧翼调控序列的克隆与分析
《作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用染色体步移技术分别克隆3个花生质体型酰基载体蛋白(ACP)基因的5′侧翼调控区序列,AhACP1、AhACP4和AhACP5基因5′上游序列分别为535、1400和1180 bp;利用5′RACE方法确定了这3个基因的转录起始位点,分别位于起始密码ATG上游–71、–92和–71 bp处。利用生物信息学软件分析了花生ACPs启动子区包含的主要调控元件,发现尽管花生AhACP4和AhACP5基因在根、茎、叶、花和不同发育期种子中的基本表达模式相似,但它们的启动子中包含各自特有的顺式元件,AhACP4启动子区包含根或芽顶端分生组织表达调控元件WUS,而AhACP5启动子区则含有侧芽萌动和伸展所需的多个关键调控元件E2FB、TELO BOX和UP1,推测它们的表达具有组织和发育阶段特异性。在进化上,花生AhACP4与拟南芥AtACP4可能为直系同源基因,但它们的表达模式产生了分歧,AhACP4为组成型表达,AtACP4主要在叶中表达;与AtACP4启动子相比,花生AhACP4启动子区中参与光调控相关元件明显减少。
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短枝型苹果赤霉素受体基因MdGID1a及其启动子克隆和表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以短枝型富士苹果‘龙富短枝’(Malus×domestica Borkh.‘Longfu Duanzhi’)枝条为试材,采用RT-PCR结合RACE技术,克隆获得苹果赤霉素受体基因MdGID1a,GenBank基因数据库的登录号为JF516247。该基因编码区共1 035 bp,推测其编码345个氨基酸。氨基酸序列分析显示,其具有HSL基因家族的保守氨基酸结构域HGG和GXSXG,与其它植物赤霉素受体基因具有较高的同源性。其启动子序列包含植物激素和光等响应元件。实时定量qRT-PCR分析表明,MdGID1a在短枝型‘龙富短枝’和普通型‘长富2号’枝条不同生长阶段、在叶片、枝条、果实、花和叶芽中的表达水平存在明显差异。苹果赤霉素受体基因MdGID1a在短枝型苹果枝条伸长过程中具有一定的调控作用。
洋葱ANS基因启动子的克隆与瞬时表达分析
《山东农业科学 》 2013
摘要：通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2.序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子结合的元件,以及参与光响应、逆境、激素应答的顺式作用元件.同时构建ANSPM1和ANSPM2驱动GUS报告基因的植物表达载体,通过洋葱表皮细胞瞬时表达分析,表明两个启动子均有活性.
关键词： 洋葱 花青素合成酶基因(ANS) 启动子 克隆 瞬时表达
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苹果α-法尼烯合酶基因的启动子序列及同源基因
《基因组学与应用生物学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：本文通过设计引物进行PCR扩增α-法尼烯合酶(AFS)基因的5'端区段并测序,获得510bp的‘国光’苹果AFS基因启动子和5'端非翻译区(5'UTR)序列,已在GenBank注册(登录号FJ263961)。序列分析结果表明,该序列具有典型的启动子特征,在转录起始点上游-46bp处有一个TATA盒,-93bp处有一个CAAT盒,-84bp处有一个W盒和-436bp处有一个热胁迫反应顺式作用元件GAAATTTTTT。与‘皇家嘎拉’苹果的AFS基因启动子序列(GenBank登录号AY786553.1)比对,本研究发现‘国光’苹果AFS基因启动子序列中有6个碱基(-186T,-207T,-283C,-301A,-413A和-433A)发生变异,‘皇家嘎拉’苹果AFS基因启动子序列相应位置的碱基分别为碱基缺失、-206C、-282G、-300G、-412G和-432G。重要的是,其中‘国光’苹果-413A碱基变异为G发生在一个热胁迫反应顺式作用元件GAAATTTTTT中,苹果虎皮病发生和AFS基因的转录表达是否受到这一碱基变异的影响值得进一步探讨。本研究结果还表明,在苹果AFS基因启动子和5'UTR序列中存在一个正向重复序列1(R9+IR18+R9),重复单元R9长度9bp,转录起始点位于其长度18bp的IR18区段。有趣的是,本研究新发现了一个与AFS基因启动子和5'UTR序列高度同源的450bp基因片段(GenBank注册登录号FJ469631),该同源片段缺失AFS基因中的27bp序列(R9+IR18,包含转录起始点)。据我们所知,这是果树中存在AFS基因启动子同源序列的首次报道。
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苹果基因邻近未知序列的PCR扩增方法
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用已知基因序列设计3个巢式PCR引物p14、p15和p16,然后设计3'端为常见酶切位点、5'端为随机引物序列p17的9个酶切位点引物。用p14外引物与9个酶切位点引物进行第1轮PCR扩增,其中前5个反应采用较低的退火温度,目的是将酶切位点引物的5'端序列引入到PCR产物中,其余反应则以此PCR产物为模板采用较高的正常退火温度进行,目的是为了使整个酶切位点引物能稳定地结合到最初反应形成的产物上。为提高PCR产物的特异性和产量,用p15和p16引物分别与p17引物配对进行第2轮和第3轮PCR扩增,电泳检查发现PCR产物条带后进行纯化和测序。为保证序列的正确性,利用测得的DNA序列再设计新引物f3x,将f3x与p14(或p15)配对、直接用提取的DNA为模板进行PCR扩增和测序。利用此方法成功地获得了苹果FPPS基因邻近的启动子序列528bp和5'UTR序列142bp,并已在GenBank注册(登录号FJ263960),利用Blastn发现这是GenBank中首次发表苹果(MalusdomesticaBorkh.)法尼基焦磷酸合酶基因(FPPS)启动子序列。
关键词： 苹果 基因 邻近序列 酶切位点引物 法尼基焦磷酸合酶 启动子
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梨韧皮部特异表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因的转化和表达
《园艺学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：以‘Old Home’梨无菌苗叶片为外植体,利用根癌农杆菌介导将专一在韧皮部表达启动子AtSUC2驱动下的GUS基因转入‘Old Home’中。筛选出了‘Old Home’梨叶片高效遗传转化的最佳条件:农杆菌和外植体在液体培养基上共培比在固体培养基上共培转化率提高5倍。PCR分析和Southern杂交鉴定表明GUS基因已整合到转基因植株的基因组中,组织化学检测和Western杂交鉴定证明了GUS基因在转基因植株韧皮部中的表达。
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