科研产出
甜樱桃病毒病分子检测技术的研究
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】建立简便、快速、高效、准确的甜樱桃病毒分子检测方法。【方法】根据我国甜樱桃病毒病害的发生特点,先后建立和完善了几种主要病毒的单重RT-PCR、多重RT-PCR、纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法,并对各检测方法的适用范围、检测效率进行比较分析。【结果】改进后的单重RT-PCR方法利用随机引物反转录得到的c DNA模板可同时用于多种病毒的特异性检测。多重RT-PCR方法可在同一管PCR反应中同时检测多种病毒。运用纳米磁珠技术结合多重RT-PCR的检测方法在植物病毒核酸提取环节简化了操作程序。【结论】该检测技术体系已应用于山东地区甜樱桃及中国樱桃等大批量植物样本的病毒检测工作之中,检测结果稳定、可靠。
关键词： 甜樱桃 病毒 检测 RT-PCR 多重RT-PCR 纳米磁珠
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甜樱桃果实发育过程中糖酸含量的变化
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了探明甜樱桃果实发育过程中糖酸动态变化。【方法】以山东泰安甜樱桃7个主栽品种为试材,利用高效液相色谱仪,测定果实不同发育阶段糖酸组分及含量变化。【结果】不同品种各糖组分及总糖含量存在较大差异,但均以葡萄糖含量最高,果糖含量最低;甜樱桃中含有苹果酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸和琥珀酸等有机酸,苹果酸在各品种中含量最高,为主要有机酸,柠檬酸次之。在果实不同发育时期,7个品种果实中总糖及各组分含量的变化趋势基本一致,随着果实发育不断增加,总酸和苹果酸含量的变化趋势基本一致,在果实发育初期逐渐增加,成熟前开始下降;柠檬酸在不同品种果实发育期间的变化差异显著;酒石酸、乙酸和琥珀酸的含量均很低,3者变化趋势基本一致,均随着果实的发育不断降低。【结论】甜樱桃组分以葡萄糖为主,总糖含量随果实发育呈整体上升趋势;有机酸以苹果酸为主,总酸含量随果实发育呈先增加后下降趋势。
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甜樱桃设施栽培环境的半自动调控及效果
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】提高甜樱桃设施栽培环境的调控精度,降低劳动强度,保证果实质量和产量的稳定。【方法】研制了一种可避免质、产量产生大幅度波动的甜樱桃半自动设施栽培系统,包括棚体,双热源加温,温、湿度、光照度自动检测、记录,自动报警4部分。连续3 a用于甜樱桃设施栽培优质稳产试验,取得预期效果。【结果】由于优化了棚体高度和棚顶斜率,使用了地炕式煤柴和太阳能2种能源互补加热,并采用现代半自动环境测控技术,使棚体可控容积增加,设施内升温热源得到保证,对棚内栽培环境的控制准确有效,与使用传统栽培大棚相比,显著提高了对连续阴冷天气的抵御能力和环境因子调控精度,连续2 a产量稳定在11 550 kg·hm-2以上,优质果率稳定在80%以上。【结论】该项措施能使甜樱桃保护地栽培果实质优稳产,对提高设施栽培的经济效益具有重要作用。
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不同砧木甜樱桃品种‘红灯’皱叶病树体内的病毒检测
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】初步探明患有皱叶病的甜樱桃树体内是否感染病毒,为皱叶病的分子生物学鉴定及综合防治提供可靠的科学依据。【方法】以嫁接在3种不同砧木上的甜樱桃品种‘红灯’叶片为试验材料,提取植物样本总RNA,采用随机六聚体引物反转录,选取10种甜樱桃病毒作为检测对象,根据各病毒基因组序列设计特异引物,进行RT-PCR检测。【结果】10种甜樱桃待检病毒中,5种病毒检测结果呈阳性,分别为PNRSV、PDV、CVA、CGRMV、LCh V-2。各皱叶病甜樱桃样品均至少同时感染2种病毒,多病毒复合感染比例较高。【结论】甜樱桃皱叶病树体内确有病毒存在,但关于病毒是否是引起皱叶病的原因还有待进一步验证。
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利用共聚焦扫描显微镜观察甜樱桃雌配子体的发育
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】快速准确的观察甜樱桃雌配子体的发育过程。【方法】应用激光共聚焦扫描显微镜法(LSCM),对甜樱桃品种‘美早’和‘布鲁克斯’的雌配子体发育过程进行了观察。将甜樱桃胚囊用戊二醛固定,脱水透明后直接用激光扫描共聚焦显微镜观察,用488 nm激光激发后,细胞核和核仁有很强的自发荧光,细胞质液泡则没有自发荧光,因此根据胚囊内核的数量、位置、大小,液泡的有无、位置等可以很清楚地观察雌配子体的发育时期。【结果】利用这种新方法观察到的雌配子体发育过程与用石蜡切片法观察的一致,但是LSCM法更简便、省时、准确;依照拟南芥中雌配子体发生的划分方法,我们把甜樱桃的雌配子体发生过程划分为6个时期。利用激光共聚焦扫描显微镜法通过延迟胚囊的发育,对‘美早’和‘布鲁克斯’甜樱桃胚囊进行观察统计,结果发现开花当天的‘美早’中没有胚囊的胚珠和胚囊发生解体的胚珠占41%,而‘布鲁克斯’中仅为21%。当胚囊延迟发育3 d后,‘美早’中胚囊的解体率达45%,败育率高达66%;‘布鲁克斯’中有35.6%的胚囊发生解体,败育率是46.6%。【结论】由此推测,‘美早’胚囊容易败育且发育成熟后解体快,而‘布鲁克斯’的胚囊败育率低,活力高。
关键词： 甜樱桃 雌配子体 激光共聚焦扫描显微镜 延迟发育
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樱桃CBF基因的克隆及序列分析
《山东农业科学 》 2014
摘要：CBF(CRT/DRE-binding factor)基因是一种低温响应转录因子基因,CBF蛋白能够与很多低温相关基因的启动子结合,使其表达,从而增强植物抗冷能力。本研究利用已经公布的CBF序列的保守区设计特异引物,对樱桃砧木吉塞拉6号的cDNA进行扩增,成功获得CBF的全长序列。序列分析结果表明,其开放阅读框为723 bp,编码240个氨基酸,具有典型的AP2结构域及CBF特有的两段短肽序列。氨基酸序列同源性分析表明,该CBF与蔷薇科植物同源性较高,与其他科属植物同源性较差。
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甜樱桃丛枝病的形态及分子鉴定
《果树学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：【目的】探明甜樱桃丛枝病是否存在植原体侵染。【方法】以3个甜樱桃园中表现丛枝病症状的植株和健康的植株叶片主脉为试材,通过提取总DNA,用植原体16S r RNA的特异引物进行巢式PCR扩增。【结果】丛枝病样品都扩增得到1.2 kb特异条带,健康样品未扩增到特异条带。将目的条带克隆测序后利用i Phy Classifier在线工具及系统进化树进行植原体亚组分类分析,发现甜樱桃丛枝病植原体属榆树黄化植原体组(16Sr V-B),与枣疯病、桃黄化、樱桃致死黄化属同一亚组。【结论】首次证实国内甜樱桃丛枝病是由16Sr V-B亚组植原体侵染引起。
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