科研产出
鸡传染性喉气管炎病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与应用
《山东农业科学 》 2024
摘要：鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)以往多感染蛋鸡,近年来在蛋种鸡、商品肉鸡中连续多发,表明该病毒感染谱有扩大风险,因此有必要加强对ILTV的监测.为建立高效、灵敏的ILTV检测方法,本研究以ILTV的TK基因为靶基因设计引物,扩增并构建pMD18-T-TK质粒标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法和标准曲线,对其特异性、敏感性和重复性进行验证,并对临床疑似病例进行检测.结果发现,该检测方法特异性良好,与其他常见症状相似病原无交叉反应;最低检测浓度为1.55拷贝/μL,灵敏度是普通PCR方法的10倍;重复性好,批内、批间变异系数在0.79%~1.83%之间.表明本研究建立的ILTV实时荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高,可为ILTV的临床诊断和流行病学研究等提供有效的检测方法.
关键词： 鸡喉气管炎病毒 TK基因 实时荧光定量PCR 特异性 敏感性 重复性
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不同分子生物学方法在H5亚型禽流感病毒检测中的应用比较
《中国动物检疫 》 2023
摘要：H5 亚型高致病性禽流感(H5-HPAI)是严重危害家禽养殖业和公共卫生健康的一类动物疫病,也是我国高度重视、严格防控的人兽共患病.目前常用检测H5 亚型禽流感病毒(H5-AIV)的分子生物学技术包括反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)、反转录重组酶辅助扩增(RT-RAA)、RT-RAA结合侧流层析试纸条(RT-RAA-LFD)、RT-RAA-簇状规则间隔短回文重复序列及其相关蛋白结合侧流层析试纸条(RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD)等.为比较不同检测方法对H5-AIV检测的灵敏度差异,将制备的cRNA标准品进行倍比稀释,分别用RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD进行检测.结果显示:RT-PCR、RT-qPCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD与RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD方法的检测灵敏度分别为 102、10-1、100、100、10-1 copies/μL.与RT-qPCR相比,RT-PCR、RT-RAA、RT-RAA-LFD、RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD在临床样本检测上具有较高的符合率,分别为 85.00%、93.75%、88.75%、91.25%.结果表明,5 种方法均对H5-AIV具有良好的检出率,但RT-qPCR与RT-RAA-CRISPR Cas13a-LFD灵敏度更高,分别适合在实验室与基层养殖场进行临床检测.本研究评估了不同方法在H5-AIV检测中的应用效果,为在不同场景下选择准确可靠的检测方法提供了参考,也为H5-AIV感染的防控提供了技术支撑.
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猪圆环病毒1型、2型、3型SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR鉴别方法的建立及应用
《中国动物传染病学报 》 2023 北大核心
摘要：猪圆环病毒(PCV)包括猪圆环病毒1型(PCV1)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3).近些年来,PCV1、PCV2、PCV3基因型之间存在共感染,因此建立一种快捷、特异、敏感的PCV1、PCV2、PCV3的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR鉴别检测方法显得尤为必要.本试验通过特异性引物筛选,各项反应条件优化,建立了实时荧光定量PCR鉴别方法.结果表明:PCV1、PCV2、PCV3检测下限分别为40.3、25.2、22.4 copies/μL.与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪细小病毒(PPV)均无交叉反应.批内及批间变异系数均小于1%.对98份PCV疑似阳性病料检测结果表明,PCV1、PCV2、PCV3感染率分别为10.2%、65.3%、53.1%,共感染率为7.1%.该方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,为PCV1、PCV2、PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术手段.
关键词： 猪圆环病毒 特异性 敏感性 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR
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猪圆环病毒1型LAMP检测方法的建立及初步应用
《山东农业科学 》 2021
摘要：为建立猪圆环病毒1型（PCV1）环介导等温扩增（LAMP）检测方法,为现场诊断提供技术支持,本试验根据GenBank公布的PCV1全基因组序列,在其保守区设计了4条特异性LAMP引物,并通过反应条件优化、敏感性试验、特异性试验以及临床样本检测,首次建立了PCV1的LAMP检测方法。结果表明,62℃水浴60 min为最佳反应条件;LAMP的检出限为1×101 copies/μL,普通PCR最低检测限为1×103 copies/μL;对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪圆环病毒2型（PCV2）、猪圆环病毒3型（PCV3）进行扩增,结果显示为阴性;应用该方法对103个临床疑似病料进行检测,阳性率为34.0%（35例）,普通PCR阳性率为29.1%（30例）,两种检测方法符合率为89.5%。本试验为PCV1临床检测提供了一种特异、快速、成本低廉的方法。
关键词： 猪圆环病毒1型 环介导等温扩增技术 特异性 敏感性
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纯电动乘用车经济性优化方法研究
《时代汽车 》 2019
摘要：能源和环保问题使纯电动乘用车经济性被日趋重视,因此经济性是纯电动乘用车的主要性能指标之一。本文选取某微型纯电动车型为研究对象,改善其NEDC工况续航里程指标。首先构建数学分析模型并确定参变量试验载荷、整车工作效率、滚动阻力系数;其次进行NEDC工况续航里程仿真分析并对仿真数据进行处理;最后进行NEDC工况续航里程试验测试,通过把仿真分析、试验测试的结果进行对比分析后,得出续航里程对参变量整车工作效率、试验载荷、滚动阻力系数变化的灵敏度,选定优化措施改善其NEDC工况续航里程指标(改善率14.4%),为改善纯电动乘用车经济性提供设计参考。
关键词： 经济性 进化论算法 仿真分析 NEDC工况 灵敏度
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中药材五灵脂特异性PCR鉴别方法的研究
《食品与药品 》 2018
摘要：目的建立快速检测五灵脂中药材动物源性成分的特异性PCR法。方法从NCBI数据库下载复齿鼯鼠及相关混伪品的16S rDNA序列,通过比对获得特异性DNA片段,设计特异引物,从复齿鼯鼠的干燥粪便中提取DNA,优化PCR扩增条件,通过特异性、灵敏度实验验证,建立特异性PCR检测体系。结果 PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后扩增出一条340 bp左右条带,而其他样品在相同条件下无扩增条带,该引物的灵敏度可达4.43ng/μl。对15种市售药材的检测结果证明该方法简便可行。结论此PCR法可快速鉴别五灵脂,不受材料和干燥程度的影响,具有操作简便、快速、特异性高的优点。
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基于表型性状的玉米特异性测试近似品种筛选方法
《植物遗传资源学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：特异性、一致性和稳定性是植物品种权授权、品种审定、登记的基本条件。近似品种选择是特异性测试的技术关键。本研究依据玉米DUS测试指南,对黄淮海地区3696份玉米品种进行了多年同一测试地点的性状观测,构建了黄淮海地区玉米品种测试性状数据库。通过对不同测试性状表达状态代码波动范围的研究,将玉米测试性状根据表达稳定性分为4级,确定了玉米品种27个测试性状表达状态代码的波动范围。在上述工作基础上,建立了基于测试性状表型数据库的近似品种筛选方法,提高了近似品种筛选的严谨性和效率。
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山东稻区二化螟对6种药剂的敏感度研究
《北方水稻 》 2018
摘要：为明确山东省不同稻区二化螟对不同类型杀虫剂的敏感性水平,筛选出绿色、高效的杀虫剂,采用人工饲料药膜法测定了山东省代表性稻区二化螟对6种杀虫剂的敏感度。结果表明,东营、济南、济宁、临沂稻区的二化螟对甲维盐、印楝素的敏感度最高,对阿维菌素、氯虫苯甲酰胺、苏云金杆菌的敏感度较高,对毒死蜱的敏感度较低。临沂稻区二化螟对氯虫苯甲酰胺的敏感性指数是东营稻区的1.58倍,济宁稻区二化螟对毒死蜱的敏感性指数是东营稻区的1.56倍;四个稻区二化螟种群对其它4种药剂的敏感度差别不大。
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苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性
《果树学报 》 2017 北大核心 CSCD
摘要：【目的】检测我国主要苹果产区田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联3种杀菌剂的敏感性现状。【方法】采用菌丝生长速率法,检测了我国6个省份的106株苹果轮纹病菌对3种杀菌剂的敏感性,采用Spearman’s秩相关系数法对3种杀菌剂的敏感性分别进行两两相关分析,比较了不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的敏感性差异。【结果】甲基硫菌灵对苹果轮纹病菌的EC50值介于0.814 5~10.700 8 mg·L~(-1),平均为(3.357 9±0.160 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵仍然较为敏感。克菌丹的EC50值介于1.672 2~38.487 3 mg·L~(-1),呈不连续单峰曲线,有敏感性下降的菌株XY7(采自河南信阳,EC50为38.487 3 mg·L~(-1))出现。剔除该菌株后,剩余105个菌株对克菌丹的敏感性频率分布呈连续偏正态分布,EC50平均值为(10.268 1±0.460 0)mg·L~(-1),可建立田间苹果轮纹病菌对克菌丹的敏感基线。代森联的EC50值介于1.276 3~32.132 4 mg·L~(-1),平均为(15.511 9±0.710 7)mg·L~(-1),敏感性频率分布呈连续性偏正态分布,可建立田间苹果轮纹病菌对代森联的敏感基线。相关性分析结果表明,甲基硫菌灵和代森联、克菌丹和代森联之间的敏感性不存在相关性,但甲基硫菌灵和克菌丹的敏感性呈显著正相关。不同省份苹果轮纹病菌对同一种杀菌剂的EC50平均值不存在明显差异(P>0.05)。【结论】田间苹果轮纹病菌对甲基硫菌灵、克菌丹和代森联的敏感性水平相对较高,并建立了田间苹果轮纹病菌对克菌丹和代森联的敏感基线。
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鸡传染性支气管炎病毒SYBR Green Ⅰ Real-time RT-PCR检测方法的建立及应用
《黑龙江畜牧兽医 》 2017 北大核心
摘要：为了建立一种快速检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,试验以构建的重组质粒作为阳性标准品,建立了IBV SYBR GreenⅠReal-time RT-PCR检测方法对其进行研究。结果表明:该检测方法的标准曲线线性关系良好,相关系数(R2)为0.998 8,可检测到7.5×103copies/μL的病毒核酸,与其他禽源病毒不发生交叉反应,重复性试验变异系数小于3%。说明该方法敏感性高、特异性强、重复性好,可用于IBV的定量检测。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒(IBV) 实时荧光定量RT-PCR 敏感性 特异性 重复性
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