科研产出
四氢嘧啶对热变性凝乳酶复性作用的研究
《安徽农业科学 》 2018
摘要：[目的]加深对部分失活的凝乳酶复性作用的了解,为热稳定性研究中部分失活态凝乳酶的制备提供参考。[方法]研究了四氢嘧啶存在的条件下,复性时间、热处理时间和热处理温度等因素对凝乳酶复性作用的影响。[结果]随着复性时间的延长,凝乳酶的活力逐渐上升。凝乳酶的复性主要发生在前24 h,36 h后凝乳酶活力基本保持稳定,复性后凝乳酶相对酶活力最高可提升21.8百分点,能够测到凝乳酶活力(相对酶活力损失<93.3%)的热处理时间,从6 min延长到12 min。在酶活力损失相近时,含四氢嘧啶的凝乳酶在较高温度下(68~70℃)保温较短时间(1~5 min),复性所致的相对酶活力提升显著高于在较低温度下(61~65℃)长时间保温(30~180 min)。[结论]酶的热失活处理的温度和时间对酶分子结构的影响效应并不相同,较长时间的热失活处理比短时高温对酶结构的破坏更彻底。
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四氢嘧啶对凝乳酶热稳定性的影响
《山东农业科学 》 2018
摘要：为研究四氢嘧啶对凝乳酶热稳定性的影响,向凝乳酶溶液中加入0.175~5.600 mmol/L的四氢嘧啶,测定不同浓度四氢嘧啶对凝乳酶活力的影响;之后测定了含0.50~2.00 mmol/L四氢嘧啶的凝乳酶溶液在69℃保温不同时间后的凝乳酶活力,将热保温后的酶溶液在4℃复性36 h,并再次测定酶活力的变化。结果显示,不同浓度四氢嘧啶对凝乳酶活力影响不大,各组酶活力均降低8.2%左右;加入四氢嘧啶会显著降低凝乳酶的热稳定性,但会发生明显的复性作用,提示四氢嘧啶可能具有维持部分失活态凝乳酶稳定性的作用。
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凝乳酶热失活动力学研究
《山东农业科学 》 2017
摘要：为研究凝乳酶在334~343 K热失活动力学表现,利用Arrhenius方程,分别计算得到了不同温度下,凝乳酶的热失活速率常数k、半衰期t_(1/2),并最终计算得到了凝乳酶的失活活化能E_a为(539.58±1.55)k J/mol。335~343 K时,数据线性回归拟合结果较好,凝乳酶的热失活符合一级反应动力学规律。在较低的334 K时,失活速率常数的线性回归分析拟合度较低,凝乳酶在保温前期失活速率常数偏高,而后期偏低,曲线斜率前后差别显著,提示凝乳酶的热失活可能存在中间过渡产物。
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微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达
《山东农业科学 》 2009
摘要：以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列。测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P.pastorisGS115/pPIC9K-m cp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/m l、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-m cp-03。用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/m l,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带。
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重组凝乳酶摇瓶发酵条件的初步优化研究
《山东农业科学 》 2009
摘要：凝乳酶是一种酸性蛋白酶,用作动物饲料添加剂,可提高动物特别是幼龄动物对饲料中蛋白成分的消化吸收率,促进其生长。本试验研究了由毕赤酵母胞外表达多拷微小毛霉凝乳酶的摇瓶发酵条件。确定最佳表达条件为:甲醇每24 h添加1.0%,无氨基酵母氮源培养基(YNB)添加1.5%,采用pH6.0的磷酸缓冲液,诱导120 h,在此条件下,重组凝乳酶的产量可达6 500 IU/ml。
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