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微小毛霉凝乳酶基因的克隆及在毕赤酵母GS115中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 张桂芝 1 ; 武彬 1 ; 井庆川 1 ; 刘辉 1 ; 石天虹 1 ; 刘雪兰 1 ; 魏祥法 1 ; 刘瑞亭 1 ;

作者机构： 1.山东省农业科学院家禽研究所

关键词： 凝乳酶;毕赤酵母;克隆;表达

期刊名称： 山东农业科学

ISSN： 1001-4942

年卷期： 2009 年 11 期

页码： 1-4+15

摘要： 以微小毛霉基因组为模板,PCR扩增得到凝乳酶结构基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,连接穿梭载体pPIC9K,转化大肠杆菌感受态细胞DH5α,并测定其核苷酸序列。测序结果证实扩增得到的片段为凝乳酶基因,与GenBank报道的序列(No.X06219)存在6对碱基的区别。将重组质粒电转化毕赤酵母GS115,构建重组菌P.pastorisGS115/pPIC9K-m cp,通过筛选得到抗G418浓度达到3.0 mg/m l、具有多拷贝基因的整合重组菌pPIC9K-m cp-03。用甲醇诱导进行初步发酵试验,测得该重组菌凝乳酶活力为5 660 U/m l,比微小毛霉发酵液提高50多倍,且发酵液电泳结果表明毕赤酵母自身分泌的蛋白很少,只能看到约38.5 ku的凝乳酶蛋白条带。

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