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肠道病毒71 VP1基因的原核表达及其抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 谢维欣 1 ; 武建明 1 ; 李杰 1 ; 方永志 1 ; 王洪梅 1 ; 何洪彬 1 ;

作者机构： 1.东北农业大学生命科学学院;山东省农业科学院奶牛研究中心;济南军区军犬训练大队

关键词： 肠道病毒71;VP1;抗血清;抗体效价

期刊名称： 免疫学杂志

ISSN： 1000-8861

年卷期： 2013 年 01 期

页码： 38-42

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的克隆并表达重组肠道病毒71(EV71)VP1基因,进行抗血清的制备并检测抗血清效价。方法利用原核表达系统将PCR获得的VP1片段构建成原核表达载体pET32a(+)-VP1,诱导其表达VP1融合蛋白并利用包涵体纯化方法进行重组蛋白的纯化,将纯化的重组蛋白免疫新西兰兔制备VP1抗血清,ELISA检测抗体效价。同时构建真核表达载体,利用其在真核细胞中的瞬时表达检测抗血清的特异性。结果通过克隆获得VP1原核表达载体,IPTG诱导VP1蛋白表达并纯化,SDS-PAGE结果显示重组蛋白表达且纯化浓度较高,将重组蛋白乳化后免疫新西兰兔3次,取血检测抗血清的效价,ELISA结果显示抗体效价为1∶64 000,利用所构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-VP1表达VP1对抗血清进行检测,Western blot结果表明抗血清可较好的与VP1特异性结合。结论制备具有免疫原性的VP1蛋白及其效价较高的抗血清,为进一步研究抗EV71诊断方法、血清学诊断试剂盒及抗病毒疫苗的研制奠定基础。

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