科研产出
萝卜ARGOSs基因的克隆及表达分析
《山东农业科学 》 2014
摘要：本研究利用RT-PCR方法从萝卜(Raphanus sativus)中分离了ARGOS基因的同源基因RsARGOS1和RsARGOS2,并对其表达模式进行了分析。结果表明,RsARGOS1基因预测编码133个氨基酸,RsARGOS2基因预测编码109个氨基酸。RsARGOS1在所有器官中均表达,其中肉质根中表达量最高,叶中表达量最低;RsARGOS2基因在花蕾中表达量最高,花序轴中的表达量最低。RsARGOSs基因表达受到激素的调节,RsARGOS1基因的表达量在喷施6-BA后明显增高,6小时左右达到顶峰,喷施NAA的影响不大;RsARGOS2基因的表达同时受NAA和6-BA的诱导,NAA的诱导幅度大于6-BA。上述研究结果对理解RsARGOSs基因参与调控萝卜的生长发育过程具有重要参考价值。
关键词： 萝卜 RsARGOS1 RsARGOS2 基因克隆 表达分析
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核桃JrCBF基因的克隆与表达和单核苷酸多态性分析
《植物遗传资源学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：根据CBF基因氨基酸保守序列设计简并引物,运用cDNA末端快速扩增(RACE)技术克隆核桃JrCBF基因cDNA全长序列。用实时荧光定量PCR分析JrCBF基因在低温胁迫下的表达模式,并分析JrCBF基因的单核苷酸多态性。结果获得长度为879 bp的CBF基因cDNA全长序列,编码214个氨基酸,命名为JrCBF;低温能诱导JrCBF基因的表达,4℃处理2 h后表达量开始增加,8 h后达到最大值;自然越冬条件下,JrCBF基因在花芽中表达量呈现先上升后下降的趋势,在寒冬时期(1月份)表达量最高;单核苷酸多态性分析JrCBF基因序列中有28个SNPs位点和7个Indels标记,存在2个突变热点区;单倍型分析显示15份材料可分为9个单倍型,单倍型多样性为0.9238。本研究为通过基因工程手段培育抗寒核桃品种和分子标记辅助育种提供了帮助。
关键词： 核桃 基因克隆 实时荧光定量PCR 单核苷酸多态性
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几丁质酶基因chiB的克隆及表达分析
《中国农学通报 》 2014 CSCD
摘要：几丁质酶能够通过破坏昆虫组织中的几丁质起到抗虫作用。为获得高表达的植物几丁质酶基因载体,通过同源克隆的手段,从粘质沙雷氏菌中分离到了chiB基因,长度为992 bp,构建了pET28表达载体,并用IPTG诱导了该基因的表达。经分析发现该基因表达产物属于糖基水解酶(glycosyl hydrolases)18家族,并利用pCAMBIA2300构建了植物表达质粒pCAM-35S-chiB。
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小麦Clp蛋白酶基因(TaClpP)的克隆与序列分析
《山东农业科学 》 2014
摘要：Clp蛋白酶(ClpP)普遍存在于各种生物体内,在蛋白质代谢调控过程中发挥着极为重要的作用。本研究利用同源克隆和RACE方法从小麦叶片中获得了TaClpP基因(GenBank No.KJ541961)的全长cDNA序列。序列分析表明,该基因含有897 bp的完整阅读框,编码蛋白含有298个氨基酸,预测相对分子量为32.6 kD,等电点为9.79。该蛋白含有一个保守的S14-ClpP-2结构域,无信号肽,定位于叶绿体。与其他植物Clp蛋白酶的氨基酸序列比对发现,TaClpP与节节麦、乌拉尔图小麦的Clp蛋白酶相似性较高。另外,以小麦基因组DNA为模板,通过PCR扩增获得了TaClpP的基因组序列,长度为3 256 bp,包含9个外显子、8个内含子。
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三个花生二酰甘油酰基转移酶基因的克隆与序列分析
《花生学报 》 2014
摘要：二酰甘油酰基转移酶在植物油脂合成途径中具有重要的作用。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了三个DGAT基因,分别命名为AhDGAT1-1、AhDGAT1-2和AhDGAT3-3。其中AhDGAT1-1全长为2020bp,ORF为1539bp,理论分子量为58.6036kD,理论等电点为8.83;AhDGAT1-2全长为2553bp,ORF为1581bp,理论分子量为60.6598kD,理论等电点为8.94;AhDGAT3-3全长为1377bp,ORF为1023bp,理论分子量为36.911kD,理论等电点为8.17。将这三个基因在GenBank上注册,注册号分别为KC736068,KC736069和KC736067。
一个新的陆地棉抗逆锌指蛋白基因GhCHP的克隆与分析
《分子植物育种 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：锌指蛋白是一类重要的转录因子,在植物应对外界生物和非生物胁迫的过程中起着极为重要的调节作用。基于二倍体雷蒙德氏棉基因组数据库,本研究从抗枯萎病、耐黄萎病的转基因抗虫棉品种鲁棉研32号中克隆到棉花锌指蛋白类基因Gh CHP。序列分析表明,Gh CHP基因的开放阅读框长度为720 bp,编码239个氨基酸,预测的蛋白质等电点为9.12。通过与其它植物锌指蛋白的序列进行聚类和比对分析,发现Gh CHP与拟南芥的AT2g16050和小麦的Ta CHP极为相近,其中两个保守的C1结构域呈典型的锌指结构。实时荧光定量PCR检测表明,Gh CHP在经过不同胁迫处理的棉花根和叶中的表达模式存在差异。PEG、Na Cl、H2O2、低温和黄萎病菌侵染处理均对Gh CHP的表达产生较大影响,表明Gh CHP可能在棉花生物和非生物胁迫响应中起重要的调控作用,是棉花品种抗逆性分子改良的重要候选基因。
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石榴花类黄酮3′羟化酶基因的克隆及序列分析
《河南农业科学 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：为研究花色苷生物合成途径中类黄酮3′羟化酶基因(F3′H)的序列信息,以泰山红石榴花瓣为试材,提取总RNA后反转录为cDNA,根据GenBank中登录的相关物种F3′H基因的保守序列设计兼并引物,对反转录后的cDNA进行PCR扩增并测序。结果表明:在石榴中克隆到了长度为996bp的F3′H基因cDNA片段,该基因编码331个氨基酸,含有细胞色素P450保守域,属于CYP75B亚家族。该序列在GenBank中的登录号为KC430328。
关键词： 石榴 类黄酮3′羟化酶基因 基因克隆 序列分析
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花生中两个硬脂酰-ACP去饱和酶基因的克隆与序列分析
《花生学报 》 2013
摘要：脂肪酸去饱和酶是不饱和脂肪酸合成途径的关键酶,催化脂肪酸链特定位置上脱氢形成双键。本研究通过构建花生种子全长cDNA文库,结合大规模EST测序和RACE克隆等方法,从花生中克隆得到了两个FAB2基因,分别命名为AhFAB2-2和AhFAB2-3。其中AhFAB2-2全长为1387bp,ORF为1158bp,理论分子量为43.7kD,理论等电点为5.69;AhFAB2-3全长为1452bp,ORF为1188bp,理论分子量为44.9kD,理论等电点为6.37。它们推导的氨基酸序列与拟南芥的相似性依次为60.8%和57.2%;与大豆的相似性分别是62.3%和59.3%。这两个基因在GenBank上的登录号分别为KF358459和KF358460。
关键词： 硬脂酰-ACP去饱和酶基因 花生 基因克隆 序列分析
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