科研产出
花生Ah MKK4基因的克隆、表达分析和亚细胞定位研究
《核农学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为挖掘花生抗逆相关基因,本研究以花生品种花育20号为试验材料,根据cDNA文库中已知的促丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)基因EST序列设计引物,通过RACE-PCR克隆得到Ah MKK4基因.结果表明,Ah MKK4基因序列全长1 434 bp,含有3'非编码区151 bp,5'非编码区317 bp,开放阅读框全长966 bp,编码一条含有322个氨基酸的蛋白序列.预测其分子量为36. 74 k Da,属于MAPKK基因家族D组成员.亚细胞定位显示Ah MKK4基因定位于细胞质和细胞核中.RT-qPCR分析发现,AhMKK4基因在根中表达量高于其他组织,说明该基因具有组织表达特异性; Ah MKK4基因受JA和IAA诱导时表达量上调,受SA和ABA诱导时表达量下调,说明该基因可能参与到JA和IAA介导的信号转导途径;AhMKK4在盐胁迫下表达量上调,说明该基因可能参与花生对盐胁迫的适应性调控.本研究结果为花生抗逆育种研究提供了新的基因资源.
关键词： 花生促丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MKK4) 基因克隆 表达分析 亚细胞定位
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甘薯淀粉合成相关酶基因的克隆与表达分析
《分子植物育种 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：为研究甘薯块根淀粉合成酶基因的表达特征,本研究以淀粉含量不同的两个品种为试验材料,利用转录组数据克隆了甘薯颗粒结合淀粉合成酶GBSS、异淀粉酶ISA、淀粉分支酶SBEⅠ、SBEⅡ的cDNA片段,采用实时荧光定量RT-PCR方法对块根不同生长期淀粉合成相关酶基因的表达进行研究。结果表明,在甘薯不同生长时期,淀粉含量从块根形成期开始逐渐积累,到栽插后80 d、110 d时达到高峰,在块根膨大后期,淀粉含量相对稳定。IbGBSSⅠ、IbSBEⅡ、IbISA 3个基因表达量呈双峰曲线变化,IbSBEⅠ表达呈单峰曲线变化。IbGBSSⅠ、IbISA在栽插后70 d和100 d时表达量达到高峰,IbSBEⅠ在栽插后70 d表达量达到最大。在不同类型甘薯品种中,IbGBSSⅠ在高淀粉品种‘漯徐薯8号’中的表达量显著高于‘郑薯20’,低淀粉品种‘郑薯20’的IbISA表达量显著高于‘漯徐薯8号’。
关键词： 甘薯(Ipomoea batatas L.) 淀粉合成相关酶基因 克隆 荧光定量 RT-PCR 基因表达
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13个苹果NAC转录因子基因的克隆与表达分析
《植物遗传资源学报 》 2019
摘要：利用同源比对和RT-PCR技术,从紫弘富士苹果(Malus domestica (Suckow)Borkh.'Zihong Fuji')中克隆了13个NAC转录因子基因:MdNAC40~45,MdNAC47~53(GenBank登录号为MG099877~MG099882,MG099884~MG099890).序列分析表明,其开放阅读框(ORF,open reading frame)分别为1470 bp、1065 bp、912 bp、885 bp、948 bp、1041 bp、1182 bp、639 bp、705 bp、1830 bp、1980 bp、747 bp和1137 bp.进化分析表明,MdNAC41属于AtNAC3组,MdNAC40、MdNAC42~43和MdNAC45~53属于NAM组,MdNAC44属于VND组.亚细胞定位预测结果显示,MdNAC40~45、MdNAC47~50和MdNAC52~53可能定位于细胞核中;MdNAC51可能定位在细胞质或细胞核中.Array结果显示,13个MdNAC基因在16个被检测组织中均有不同程度的相对表达水平.RNA-seq结果显示,MdNAC43、MdNAC45、MdNAC47、MdNAC49和MdNAC51的表达明显受斑点落叶病菌(AAAP,Alternaria alternata apple pathotype)侵染的诱导.实时荧光定量PCR分析表明,在150 mmol/L NaCl处理下,嘎啦组培苗中MdNAC45、MdNAC47和MdNAC52的转录水平受到诱导,而MdNAC40、MdNAC48和MdNAC51的转录水平下调;在300 mmol/L甘露醇处理下,MdNAC50转录水平受到诱导,MdNAC41转录水平下调.这表明MdNAC基因多呈组成型表达,并受斑点落叶病菌(AAAP)、NaCl和甘露醇诱导或下调,可能参与调控苹果生长发育和逆境胁迫等过程.
关键词： 苹果 NAC转录因子 基因克隆 序列分析 表达分析
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保加利亚乳杆菌N-乙酰胞壁质酶基因的克隆及生物信息学分析
《江苏农业科学 》 2019 北大核心
摘要：为了研究保加利亚乳杆菌N-乙酰胞壁质酶基因的结构特征及编码蛋白的功能,根据GenBank中其基因的DNA序列设计引物,以保加利亚乳杆菌MN株的基因组为DNA模板,利用PCR技术扩增N-乙酰胞壁质酶基因,将其克隆到pMD-19T载体上,进行测序与生物信息学分析.结果表明,MN株N-乙酰胞壁质酶基因序列编码217个氨基酸,与GenBank中公开的N-乙酰胞壁质酶基因核苷酸序列的同源性为98.8%~100.0%;蛋白质的理论分子质量为24.55 ku,理论等电点为9.83;该蛋白属于亲水性蛋白,二级结构以α-螺旋为主;该蛋白的第16~38位氨基酸残基组成跨膜区,第56~216位氨基酸残基组成LYZ2结构域.研究结果为今后探讨N-乙酰胞壁质酶基因的生物学功能及其功能改造奠定了基础.
关键词： 保加利亚乳杆菌 N-乙酰胞壁质酶 克隆 生物信息学分析
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玉米PIN家族基因在雌花序发育过程中的表达分析
《山东农业科学 》 2019
摘要：生长素是一类重要的植物发育调控因子,其代谢和转运在植物的器官形成和分化中均发挥重要作用.植物特有的生长素外运载体PIN是一类膜蛋白,和生长素极性运输相关.本研究中,我们对玉米PIN基因家族的14个成员在雌花序发育过程中的表达模式进行了分析.除了未检测到ZmPIN9基因的表达外,其余13个基因根据表达模式可分为三类:第一类包括ZmPIN1a、ZmPIN1b、ZmPIN1d、ZmPIN5c和ZmPIN8五个基因,在SPM(小穗对原基)时期表达量最高;第二类包括ZmPIN1c、ZmPIN10b、ZmPINx和ZmPINy四个基因,在SM1(小穗原基早期)时期表达量最高;第三类包括ZmPIN2、ZmPIN5a、ZmPIN5b和ZmPIN10a四个基因,在F(花器官)时期表达量最高.为了进一步了解ZmPIN家族基因的表达模式,我们对这14个基因在不同组织器官中的表达模式进行了分析,依然未检测到ZmPIN9基因的表达,可能是其表达量极低或在特定部位或特定时期表达;ZmPIN5a基因在叶中的表达量最高;其余12个ZmPIN基因均在雄花序中高表达.这些结果说明ZmPIN基因在玉米生殖器官尤其是雌花序的发育过程中起重要作用.
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栽培种花生FAE1基因的克隆和序列分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：脂肪酸链延长酶1(FAE1)是控制脂肪酸延长的关键酶,对芥酸的生物合成有至关重要的作用。本研究从栽培种花生的两个染色体组中分别克隆得到2个FAE1基因,命名为FAE1-A和FAE1-B。FAE1只有一个开放阅读框,无内含子,完整编码区长1 536 bp,编码511个氨基酸。利用相关软件或在线工具对FAE1进行生物信息学分析,结果表明其编码蛋白二级结构以α螺旋为主;无信号肽,表明FAE1蛋白不是分泌蛋白,而是在细胞中发挥作用,且主要存在于内质网上;FAE1蛋白不稳定系数小于40,总平均亲水系数为负数,属于不稳定的亲水性蛋白。本研究可为花生低芥酸育种提供依据。
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一株基因10型Ⅰ类新城疫病毒P基因的遗传进化分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：为探讨新城疫病毒(NDV)P基因及其编码蛋白的遗传进化特性,了解野鸟源NDV的基因变异情况,本研究对我国首次分离的野鸟源Ⅰ类NDV分离株SD18/13的P基因进行了测序,并从Gen Bank中选取不同基因型毒株的P基因序列进行遗传进化分析。结果表明,SD18/13 P基因开放阅读框全长1 200 bp,编码399个氨基酸,与Ⅰ类NDV的氨基酸同源性为83.5%~98.5%,与Ⅱ类NDV的氨基酸同源性为67.2%~70.5%。SD18/13与法国分离株Teal/France/10010/2010聚于一簇,同属于基因10型Ⅰ类NDV,两者P基因的核苷酸同源性为98.2%,氨基酸同源性为98.5%。
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山东省副猪嗜血杆菌分子流行病学调查及其外膜蛋白P2基因的表达纯化
《中国动物传染病学报 》 2018
摘要：根据副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)外膜蛋白(outer membrane proteins,Omp)P2基因序列(GenBank登录号:FJ685754.1)设计引物,对2015~2016年在山东省不同地区采集的225份病料进行PCR扩增和遗传演化分析,结果发现2015年和2016年Hps检出阳性率分别为7.63%、7.48%,细菌分离确定225份样品中17份为阳性;Hps菌株之间的氨基酸同源性在86.7%~99.7%,同源性较高的蛋白具有交叉反应性.构建Hps ompP2基因原核表达载体,确定OmpP2蛋白的最佳诱导温度,通过亲和层析Ni-IDA树脂纯化,获得高纯度的OmpP2蛋白,Western blot确定纯化的OmpP2蛋白与不同血清型的Hps阳性血清均存在良好的反应原性.本研究为进一步探索Hps OmpP2的生物学特性及对副猪嗜血杆菌病的血清学诊断、亚单位疫苗的开发奠定了基础.
关键词： 副猪嗜血杆菌 流行病学 ompP2基因 表达 纯化
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植物3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶基因研究进展
《生物技术进展 》 2018
摘要：细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、叶绿素、萜类等类异戊二烯物质,是植物中广泛存在的一类代谢产物,在植物生长发育过程中起着非常重要的作用。一些萜类化合物作为药物的合成前体或有效的药用成分在工农业及医药生产上具有重要的经济价值。类异戊二烯物质主要通过甲羟戊酸代谢途径中的一系列酶催化合成,其中,3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase,HMGR)是该代谢途径中的第一个关键限速酶,能够将3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A转化成中间代谢产物甲羟戊酸。对植物HMGR基因的克隆、酶结构和功能分析、基因组织表达及调控等方面进行了综述,旨在为其在重要农作物的遗传改良、代谢产物工程植物创制以及植物亲缘关系分析中的应用等研究提供理论依据。
关键词： 植物 3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶 基因克隆 酶结构及功能 基因表达及调控
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石榴3-脱氢奎尼酸合成酶基因的克隆及表达分析
《湖北农业科学 》 2018
摘要：利用RT-PCR技术从泰山红石榴(Punica granatum L.)果皮中获得3-脱氢奎尼酸合成酶(DHQS)基因cDNA序列,分析了其在不同石榴品种发育期果实中的表达情况。结果表明,DHQS基因cDNA序列长273 bp,编码91个氨基酸,编码蛋白具有典型的DHQ_Fe_ADH超家族保守结构域。该基因核苷酸序列与欧洲山毛榉、梅花和蒺藜苜蓿的相似性分别为91%、87%和88%,氨基酸序列与欧洲山毛榉、苹果、白梨和拟南芥的相似性分别为95%、92%、92%和88%。两个石榴品种发育期果皮中DHQS基因相对表达量逐渐降低,均在7月15日出现峰值。整个发育期,泰山红DHQS基因表达量高于泰山三白甜。
关键词： 石榴(Punica granatum L.) 3-脱氢奎尼酸合成酶 克隆 表达分析
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