科研产出
封闭液对ELISA检测蓖麻毒素的影响
《吉林农业科学 》 2008 CSCD
摘要：通过对30种封闭液与3种封闭条件对ELISA检测蓖麻毒素方法的封闭条件进行了优化,由P/N值得到1%酪蛋白+5%脱脂乳与5%脱脂乳+2%PEG 2万两种封闭剂在包被后孵育一次的封闭效果相似,也是所有组合中封闭效果最好的,从而大大提高了ELISA检测蓖麻毒素的敏感性和特异性。
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狂犬病诊断基因芯片的建立和检测应用的初步研究
《中国预防兽医学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：根据已发表的狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成能扩增高度保守核(N)蛋白片断的一对引物。通过生物素标记PCR技术,将核(N)蛋白基因片断作为探针点在硝酸素纤维膜上,制作成疾病诊断基因芯片。取160份可疑动物的血液,提取核酸作模板进行PCR扩增,将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测;并用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立检测RV抗体的间接ELISA。把以上两种方法应用于临床,结果基因芯片的检测率比ELISA方法和(RT)PCR要高15%左右,表明建立的狂犬病诊断基因芯片具有更高的灵敏度和特异性。
关键词： 狂犬病病毒 基因芯片 间接ELISA (RT)PCR
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狂犬病病毒低密度基因芯片的建立及其与常规检测方法的比较研究
《江苏农业科学 》 2007 北大核心
摘要：根据已发表狂犬病病毒(RV)的序列,设计合成扩增高度保守核(N)蛋白片断的引物。通过生物素标记的RT-PCR技术和微量点样技术,将高度保守N蛋白基因片段作为探针点,在硝酸纤维素膜上制成16点阵的低密度诊断基因芯片。提取160份可疑犬的血液,以核酸作模板进行RT-PCR扩增,将其产物分别用琼脂糖凝胶电泳和低密度芯片检测;同时采用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立间接ELISA的检测方法。试验结果表明,RV低密度基因芯片的检测率比ELISA方法和RT-PCR方法灵敏度高、特异性强,完全可以作为临床诊断的一种方法。
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鸭肝炎病毒单克隆抗体的研制
《中国预防兽医学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：以反复冻融、氯仿处理、滤膜过滤、PEG反透析浓缩和分子筛层析的方法纯化DHV免疫BALB/c小鼠,同时作为包被抗原建立了筛选抗DHV阳性杂交瘤细胞株的间接ELISA方法,经特异性和重复性试验,效果良好。经一系列融合、筛选,成功获得阳性杂交瘤细胞株4株,并制备出了腹水,分别命名为2B5、2E8、5E6和6C11。特性鉴定结果表明4株单抗ELISA效价均比较高且特异性好,中和特性稍差,和两株Ⅰ型标准毒以及在山东分离到的几株病毒均有交叉反应。
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H_5亚型禽流感单克隆抗体的研制及应用
《家禽科学 》 2005
摘要：以禽流感H5亚型病毒分别免疫BABL/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)和间接ELISA检测细胞上清液,结果获得了3株抗禽流感H5亚型病毒特异性单克隆抗体,分别命名为1B6,1D4,7D1;其中1D4株为抗禽流感H5亚型病毒血凝素特异性单克隆抗体细胞株,1B6株和7D1株为针对禽流感病毒NP蛋白的单克隆抗体细胞株。经3次亚克隆后,100%杂交瘤细胞保持了分泌抗禽流感病毒抗体的能力。这些单克隆抗体小鼠腹水ELISA效价为105,HI效价为211￣12。研究结果表明,所有这些单克隆抗体仅与相应的禽流感病毒株发生特异性反应,而不与鸡新城疫病毒、产蛋下降综合征病毒、鹅副粘病毒等反应。所有这些单抗在禽流感诊断中将发挥重要作用。
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鸡传染性法氏囊病间接ELISA诊断试剂盒的研制及初步应用
《中国兽医学报 》 2003 北大核心 CSCD
摘要：采用 vero细胞增殖的 IBDV抗原建立了间接 EL ISA,用于定量检测 IBDV抗体。对该方法进行了标准化研究 ,确立了该方法的最佳工作条件。在此基础上研制了相应的诊断试剂盒 ,并对盒内各组分的性状、保存、质量控制以及诊断试剂盒的特异性、敏感性、可重复性、符合率、与国外同类产品的比较、保存期等进行了全面、详细的研究。结果表明 ,研制的试剂盒在 - 2 0℃保存至 6个月时各项性能都很好。该试剂盒与进口试剂盒对同样血清样品检测 ,符合率为86 .7%。间接 EL ISA试剂盒与琼扩试验的符合率为 92 .5 %。该试剂盒可对大量血清样品进行检测 ,操作简单方便、结果特异性强、敏感性高、快速 ,更适合于大型鸡场 IBD免疫抗体水平的监测及现地疫病诊断等需要。
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