科研产出
葡萄根癌病病原菌的筛选及鉴定
《农学学报 》 2019
摘要：明确引起济南南部山区葡萄根癌病的病原菌种类,为病害防治提供科学依据。以形态学为基础,结合生理生化及分子生物学方法对‘赤霞珠’葡萄根癌病样品进行分离鉴定。结果表明,从根部肿瘤组织中利用MW选择性培养基分离纯化了12株类似于根癌土壤杆菌的细菌。形态学和16S rDNA检测表明12株菌均为根癌土壤杆菌属。其中生化Ⅰ型5株、生化Ⅱ型4株、生化Ⅲ型3株。采用针刺涂抹法接种胡萝卜圆盘、向日葵、葡萄幼苗,确定了2株强毒性菌株JC02、JC05。2个株菌均为生化Ⅲ型菌株。质粒生物学鉴定表明JC02、JC05菌株含有Ti质粒,为章鱼碱类型。研究表明,为害济南南部山区‘赤霞珠’葡萄根癌病的病原菌为葡萄土壤杆菌(Agrobacterium vitis)。
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奶牛卵巢中一株IBRV的分离鉴定
《山东农业科学 》 2019
摘要：利用MDBK细胞从奶牛卵巢中分离到一株牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)毒株。设计扩增IBRV的通用引物,对卵巢组织中的病毒进行PCR扩增及测序;对卵巢组织感染MDBK细胞,进行IBRV的分离培养;测定IBRV的TCID_(50),同时利用IBRV FA进行鉴定。结果表明,分离到的病毒在MDBK细胞上产生了明显的病变;用特异性引物可扩增出特异性目的条带,目的序列与IBRV基因序列一致;该毒株的病毒滴度为10~(6.75) TCID_(50)/mL。
关键词： 卵巢 牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) 鉴定 细胞病变 TCID_(50)
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消氨菌的分离、鉴定及其急性经口毒性
《山东农业科学 》 2019
摘要：为筛选出安全且能降低畜禽舍内氨气浓度的菌株,本研究从鸡粪、活性淤泥等6个样本中分离单一菌株,检测菌株的除氨效果,并对较优除氨功能的菌株进行鉴定和急性经口毒性试验。结果表明,分离到两株单一菌株,经检测其中一株具有较强除氨能力,初步鉴定该菌株属于金黄杆菌属(Chryseobacterium);经急性经口毒性试验发现,菌液对小鼠半数致死量(LD_(50))大于20 g/kg BW,属实际无毒级;处理14 d后,小鼠血清中谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)、尿素(BUN)、肌酐(Cre)、血糖(GLU)、总胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量与对照组均无显著性差异(P>0.05)。因此,该菌安全无毒副作用,可应用于畜禽养殖业有害气体的消除。
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鸡传染性支气管炎病毒山东分离株S1的测序分析及致病性
《中国兽医学报 》 2019 北大核心 CSCD
摘要：从山东某地疑似患肾型鸡传染性支气管炎(IB)的病死鸡的肝、肺、肾脏中分离到1株病毒,经过SPF鸡胚传代接种、血凝试验、鸡胚矮化试验、RT-PCR鉴定及测序分析、动物回归试验,确定为鸡传染性支气管炎病毒,并命名为SD/04/18株.结果显示,经3%胰蛋白酶处理后,病毒分离株有血凝性,未经处理病毒分离株不具有血凝性;鸡胚矮化试验发现该毒株明显抑制胚胎发育;进化树比对发现,该毒株与我国主要流行的QX株同源性最高,S1基因序列相似性为96.4%,氨基酸序列相似性为95.3%.分离株用SPF鸡胚连续传3代后接种8日龄SPF雏鸡,复制出了与自然病例相同的临床症状,肺、脾、肾、气管等器官出现典型病理变化.免疫组织化学法检测在气管环纤毛、肾小管上皮细胞间隙等部位可见抗原聚集.对被感染试验鸡的口腔、泄殖腔排毒进行跟踪检测,直到试验结束,被感染鸡仍有很高的病毒检出率.结果表明,最终确定该毒株为肾型鸡传染性支气管炎病毒.
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 分离 鉴定 S1基因 病理变化 免疫组化
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防治蔬菜灰霉病的生防菌SFJ1的鉴定及抑菌活性
《农药 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：[目的]为创制生物农药,对一株生防菌SFJ1进行了菌种鉴定,同时考察其抑菌活性。[方法]通过生理生化和16S rDNA基因序列分析,对生防菌SFJ1进行鉴定;通过含毒介质法和叶面喷雾法,分别测定生防菌的室内毒力和盆栽防效。[结果]生防菌SFJ1鉴定为贝莱斯芽胞杆菌,对黄瓜灰霉病室内EC_(50)和EC_(90)值分别为0.6594×10~4、36.0036×10~4 cfu/mL;经生防菌发酵原液处理后,黄瓜灰霉病的盆栽4、7 d防治效果分别为86.84%和84.09%。[结论]该生防菌具有开发成生物农药的潜力。
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山东茶园土壤几丁质降解菌的分离、鉴定及产酶特性研究
《山东农业科学 》 2018
摘要：为了筛选到适合山东茶园土壤环境的几丁质降解菌,以提高土壤几丁质的降解速率,本试验以胶状几丁质为唯一碳源,从山东省泰安市茶园土壤中筛选出两株高活性几丁质降解菌,命名为J4、J17。通过生理生化、形态观测和分子鉴定,确定J4属于鞘氨醇杆菌属,J17属于芽孢杆菌属。产酶特性研究表明,最优产酶条件菌株J4为培养温度30℃、pH值7.0、转速200 r/min,J17为培养温度25～30℃、pH值7.0、转速180 r/min;混合菌株J4+J17的产酶能力比J4、J17单一菌株的产酶能力高,分别高出9%和23%。本研究结果可为后续菌剂的制备及工厂化发酵研究奠定基础。
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应用多重实时荧光PCR方法对8种动物毛纤维种类鉴别的研究
《畜牧兽医学报 》 2018 北大核心 CSCD
摘要：本研究旨在利用多重实时荧光PCR方法对水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物毛纤维进行物种鉴定研究。利用碱裂解法加入二硫苏糖醇,并结合硅珠吸附核酸法来优化动物毛纤维DNA的提取;根据8种动物16S rDNA基因特异核苷酸序列设计通用PCR引物和特异性TaqMan荧光探针;通过优化引物和探针浓度及退火温度等PCR反应体系和条件,建立了多重实时荧光PCR检测体系;并对多重PCR体系的特异性、灵敏度、重复性和适用性进行评估。结果表明,使用SDS-二硫苏糖醇DTT-蛋白酶K结合Chelex-100法,并利用硅珠纯化提取动物毛纤维DNA效果最佳,满足实时荧光PCR检测要求。本方法 DNA灵敏度为0.01ng,混合样本方法检出限为1.0%。因此本方法能够从动物毛纤维提取高质量DNA,建立的多重实时荧光PCR检测体系具有特异性强、重复性好和灵敏度高等优势。本方法可用于水貂、狐狸、骆驼、兔、山羊、绵羊、鸭和鹅8种动物及其混合物毛纤维的鉴定,为拓展动物毛纤维在物种识别、分子进化研究、分子标记辅助育种和遗传资源评价等领域中的应用奠定基础。
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肉鸡产业链主要抗药性菌株的分离鉴定与抗药性分析
《山东农业科学 》 2018
摘要：为分析肉鸡产业链各环节主要抗药性菌株的流行状况,保证食源性公共卫生安全,本试验采集肉鸡养殖、屠宰及加工各环节的样本108份,通过6种不同含药物培养基初步筛选抗药性菌株,经VITEK2自动微生物鉴定和自动药敏检测,并与微量肉汤稀释法药敏试验进行比较。结果表明,从肉鸡产业链各环节共鉴定获得664株细菌,其中前三位的优势细菌为大肠杆菌375株(56.5%)、肺炎克雷伯菌110株(16.6%)和奇异变形杆菌79株(11.9%)。微量肉汤稀释法药敏试验结果显示,大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌对阿莫西林/克拉维酸、多西环素抗药率都在90%以上,对环丙沙星和丁胺卡那霉素抗药率在34.6%~87.0%之间,对美罗培南敏感。三种抗药菌显示多重抗药性特征,集中在三、四重抗药水平。VITEK2自动药敏试验结果显示,大肠杆菌对氨苄西林、头孢唑啉抗药率分别是98.3%、92.6%;全部对厄他培南、亚胺培南敏感。肺炎克雷伯菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦抗药率分别是97.3%、89.1%;大部分对厄他培南和亚胺培南敏感,肺炎克雷伯菌的抗药性水平普遍稍高于大肠杆菌,二者呈正相关性。微量肉汤稀释法和VITEK2自动药敏试验两种方法重叠使用了环丙沙星和丁胺卡那霉素,检测结果差异不显著。肉鸡产业链各环节大肠杆菌的抗药性显著高于EUCAST数据库的结果,建议相关部门应加强细菌抗药性监测,并逐步降低抗药性,保障食品安全和公共卫生。
关键词： 肉鸡 抗药性 大肠杆菌 肺炎克雷伯菌 鉴定 药敏试验
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