科研产出
INCENP基因功能性单倍型可调控启动子活性并影响公牛精液品质
《遗传 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究内着丝粒蛋白(Inner centromere protein,INCENP)基因启动子区单核苷酸多态性(SNPs)与精液品质的相关性,本文利用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测了250头中国荷斯坦公牛INCENP基因的基因型。在INCENP基因启动子区鉴定出两个SNPs(g.-556 G>T,rs 136823901和g.-692 C>T,rs 211010999),发现了3种单倍型(CG、TT、TG)。分析两个SNP位点的基因型频率和等位基因频率,各SNP及单倍型组合与中国荷斯坦公牛精液品质的相关性,结果表明SNP位点g.-556 G>T GT基因型个体的鲜精活力显著高于GG基因型个体(P<0.05),单倍型组合H1H1(CCGG)、H1H3(CTGT)、H2H3(TTGT)和H3H3(TTTT)个体的鲜精活力和冻精解冻后活力均显著高于H1H2个体(P<0.05)。为进一步研究g.-556 G>T和g.-692 C>T影响精液品质的可能机理,本文将3种单倍型质粒分别转染小鼠睾丸间质细胞(MLTC-1),结果显示含TG单倍型的载体荧光素酶活性最高。由此推测,g.-556 G>T和g.-692 C>T为启动子区功能性突变位点,可通过调节启动子活性来调控INCENP基因表达,进而影响精液品质。
关键词： INCENP SNP 单倍型 启动子区 精液品质 基因表达
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花生AhDGAT2a基因启动子的克隆和功能验证
《作物学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：二酰甘油酰基转移酶(DGAT)是三酰甘油(TAG)合成途径的限速酶,对脂肪酸合成的调节具有关键作用。为了研究AhDGAT2a的表达调控,利用Genome Walking方法从鲁花14基因组中克隆了AhDGAT2a上游5￠侧翼调控区1200 bp序列,即AhDGAT2a启动子(pAhDGAT2a)序列,并利用生物信息学软件分析其包含的调控元件,发现其含有多个TATA-box和CAAT-box、光调控元件、胁迫防御相关元件和激素响应元件。用pAhDGAT2a构建pAhDGAT2a:GUS植物表达载体并转化烟草品种SR1。利用组织染色法鉴定转基因烟草的GUS表达模式,发现在转基因烟草的各个器官均有GUS酶活,在柱头、花药和幼嫩种子中表达量较高,说明pAhDGAT2a具有一定的组成型启动子活性。
关键词： 花生 AhDGAT2a基因 启动子 功能验证
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棉花转录因子GhSNAC3启动子的克隆与表达分析
《华北农学报 》 2016 北大核心 CSCD
摘要：为研究棉花NAC转录因子基因GhSNAC3启动子的结构和功能,以鲁棉研32号基因组为模板,用PCR扩增的方法得到棉花基因GhSNAC3的启动子序列,利用分析网站PlantCARE、PLACER和BDGP对启动子上存在的顺式作用元件进行了预测与分析,在此基础上利用该启动子及GhSNAC3基因构建植物表达载体,并通过烟草遗传转化进一步研究启动子的转录活性。结果表明GhSNAC3启动子除含有CAAT-box等基本顺式作用元件外,还含有茉莉酸、赤霉素和脱落酸响应元件以及大量光顺式作用元件和逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件。采用不同胁迫处理转基因烟草并进行表达分析,结果显示GhSNAC3在盐胁迫下植株根部有高水平的表达,而在茎和叶中表达量极低,表明GhSNAC3在逆境胁迫应答过程中可能具有重要功能,其启动子是一个盐诱导型启动子,具有组织特异性。研究结果为棉花NAC信号通路研究和耐盐基因工程改良提供了理论依据。
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氟氯吡啶酯和啶磺草胺复配制剂不同条件下除草效果评价
《山东农业科学 》 2016
摘要：氟氯吡啶酯是芳香基吡啶甲酸类人工合成激素类除草剂,啶磺草胺是乙酰乳酸合成酶抑制剂,为明确二者复配制剂200 g/L啶磺草胺·氟氯吡啶酯WG在田间施用的推荐剂量、除草效果及对小麦的安全性,本研究连续2年度设计进行3个试验,全面评价该制剂在冬前、冬后、添加助剂及遇干旱条件下施用的除草效果及对小麦的安全性。结果表明,200 g/L啶磺草胺·氟氯吡啶酯WG在冬前和春季施用,对雀麦、播娘蒿、荠菜、小花糖芥均有较好的防除效果,田间推荐剂量以15~25 g/hm~2为宜;添加助剂可以显著提高其速效性和最终防效,推荐剂量添加0.25%助剂GF-2607对阔叶杂草的防效在93%以上,对雀麦的防效在97%以上;施药前后长期干旱会显著降低杂草死亡率,浇水解除旱情后可显著提高杂草防效,浇水后杂草株防效从63.7%~81.6%提高到94.7%~98.8%;200 g/L啶磺草胺·氟氯吡啶酯WG低温下施用或喷药后遇强降温,可以显著降低对播娘蒿的防除效果,且可以造成小麦短时间的黄化、株高受抑制,对后期产量影响不大。建议在日最高温度稳定在10℃以上时施药。
关键词： 氟氯吡啶酯 啶磺草胺 除草效果 干旱 助剂 小麦 安全性
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花生质体型酰基载体蛋白基因5′侧翼调控序列的克隆与分析
《作物学报 》 2014 北大核心 CSCD
摘要：采用染色体步移技术分别克隆3个花生质体型酰基载体蛋白(ACP)基因的5′侧翼调控区序列,AhACP1、AhACP4和AhACP5基因5′上游序列分别为535、1400和1180 bp;利用5′RACE方法确定了这3个基因的转录起始位点,分别位于起始密码ATG上游–71、–92和–71 bp处。利用生物信息学软件分析了花生ACPs启动子区包含的主要调控元件,发现尽管花生AhACP4和AhACP5基因在根、茎、叶、花和不同发育期种子中的基本表达模式相似,但它们的启动子中包含各自特有的顺式元件,AhACP4启动子区包含根或芽顶端分生组织表达调控元件WUS,而AhACP5启动子区则含有侧芽萌动和伸展所需的多个关键调控元件E2FB、TELO BOX和UP1,推测它们的表达具有组织和发育阶段特异性。在进化上,花生AhACP4与拟南芥AtACP4可能为直系同源基因,但它们的表达模式产生了分歧,AhACP4为组成型表达,AtACP4主要在叶中表达;与AtACP4启动子相比,花生AhACP4启动子区中参与光调控相关元件明显减少。
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短枝型苹果赤霉素受体基因MdGID1a及其启动子克隆和表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以短枝型富士苹果‘龙富短枝’(Malus×domestica Borkh.‘Longfu Duanzhi’)枝条为试材,采用RT-PCR结合RACE技术,克隆获得苹果赤霉素受体基因MdGID1a,GenBank基因数据库的登录号为JF516247。该基因编码区共1 035 bp,推测其编码345个氨基酸。氨基酸序列分析显示,其具有HSL基因家族的保守氨基酸结构域HGG和GXSXG,与其它植物赤霉素受体基因具有较高的同源性。其启动子序列包含植物激素和光等响应元件。实时定量qRT-PCR分析表明,MdGID1a在短枝型‘龙富短枝’和普通型‘长富2号’枝条不同生长阶段、在叶片、枝条、果实、花和叶芽中的表达水平存在明显差异。苹果赤霉素受体基因MdGID1a在短枝型苹果枝条伸长过程中具有一定的调控作用。
洋葱ANS基因启动子的克隆与瞬时表达分析
《山东农业科学 》 2013
摘要：通过PCR方法对洋葱花青素合成酶基因(AcANS)上游启动子序列进行扩增,获得长度为1.8 kb和2.2 kb的两种片段,命名为ANSPM1和ANSPM2.序列分析表明,克隆到的两个启动子除含有多个TATA-box、CAAT-box等基本启动子元件,还含有与MYB转录因子结合的元件,以及参与光响应、逆境、激素应答的顺式作用元件.同时构建ANSPM1和ANSPM2驱动GUS报告基因的植物表达载体,通过洋葱表皮细胞瞬时表达分析,表明两个启动子均有活性.
关键词： 洋葱 花青素合成酶基因(ANS) 启动子 克隆 瞬时表达
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牛MBL1基因启动子区单核苷酸多态性
《中国农业科技导报 》 2011 CSCD
摘要：为研究牛甘露糖结合凝集素1(mannose-binding lectin 1,MBL1)基因启动子区单核苷酸多态性,采用聚合酶链式反应限制片长多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)、单链构象多态性(single-strand conformation polymorphism,SSCP)及直接测序的方法检测了1 073头中国荷斯坦奶牛、69头鲁西黄牛和24头渤海黑牛启动子区-2194(A>C)、-1446(T>C)、-1330(G>A)三个位点的不同基因型分布。结果表明,在-2194位点和-1330位点处渤海黑牛只检测到两种基因型(AA/AC,GG/GA);而鲁西黄牛群体中在-1330位点处没有检测到AA型。三个品种牛群在该三个位点的优势等位基因相同,分别为A、C、G,频率为A(CH 0.900 1/LYC 0.760 9/BBC 0.937 5)、C(CH 0.604 8/LYC 0.768 1/BBC 0.625)和(CH 0.725 1/LYC0.869 6/BBC 0.895 8)。三个品种牛的优势等位基因相对保守,需进一步研究分析这3个多态位点与牛生产性状的关系。
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