科研产出
短枝型苹果赤霉素受体基因MdGID1a及其启动子克隆和表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：以短枝型富士苹果‘龙富短枝’(Malus×domestica Borkh.‘Longfu Duanzhi’)枝条为试材,采用RT-PCR结合RACE技术,克隆获得苹果赤霉素受体基因MdGID1a,GenBank基因数据库的登录号为JF516247。该基因编码区共1 035 bp,推测其编码345个氨基酸。氨基酸序列分析显示,其具有HSL基因家族的保守氨基酸结构域HGG和GXSXG,与其它植物赤霉素受体基因具有较高的同源性。其启动子序列包含植物激素和光等响应元件。实时定量qRT-PCR分析表明,MdGID1a在短枝型‘龙富短枝’和普通型‘长富2号’枝条不同生长阶段、在叶片、枝条、果实、花和叶芽中的表达水平存在明显差异。苹果赤霉素受体基因MdGID1a在短枝型苹果枝条伸长过程中具有一定的调控作用。
苹果NAD–苹果酸酶基因的克隆及在不同组织和果实发育阶段的表达分析
《园艺学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：NAD-malic enzyme(NAD-ME)是植物调控苹果酸代谢中的关键酶。以富士苹果(Malus×domestica Borkh.)叶片为试材,通过同源比对和RT-PCR技术,克隆获得2个NAD–苹果酸酶基因(MdNAD-ME1和MdNAD-ME2)。其ORF分别为1 785 bp和1 818 bp,推测其分别编码595和605个氨基酸的多肽。氨基酸序列和结构分析显示,含有5个保守的氨基酸区域(Ⅰ~Ⅴ),包含2个功能结构域:malic和NAD_bind_1_malic_enz。进化树分析结果显示,MdNAD-ME1属于α组双子叶亚组,MdNAD-ME2属于β组双子叶亚组。荧光实时定量结果显示,MdNAD-ME在被检测的组织中呈组成型表达,且在多种组织中MdNAD-ME1表达量高于MdNAD-ME2。在富士苹果果实不同发育阶段,MdNAD-ME1与MdNAD-ME2具有不同的表达模式。以上结果表明,克隆得到的MdNAD-ME1和MdNAD-ME2属于植物NAD-ME,在苹果的生长和发育过程中MdNAD-ME1和MdNAD-ME2可能起到不同作用。
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应用IT-ISJ标记分析加工苹果品种的遗传关系
《青岛农业大学学报(自然科学版) 》 2010
摘要：以鲁加1号(Malus domestica Borkh.‘Lujia 1’)等31个加工苹果品种为试材,采用IT-ISJ标记(Intron Targeted Intron-exon Splice Junction,内含子-外显子拼接位点标记)技术,分析了苹果品种的遗传关系。结果表明,供试的31个苹果品种的相似系数平均值为0.49,变异系数为0.49±0.37。其中,倭锦和邦扎相似系数最小,仅为0.26;鲁加2号和鲁加6号相似系数最大,达到了0.86。供试苹果品种中相似系数大于0.50的组合有182个,占供试组合总数的39.3%,而相似系数小于0.50的组合有283个,占供试组合总数的60.7%,说明供试苹果品种之间存在较大的遗传差异。
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晴天条件下光、温变化对苹果绿色果皮原初光化学反应的影响
《应用生态学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用快速叶绿素荧光诱导动力学和光谱反射测定技术,研究了晴天条件下,光、温变化对苹果绿色果皮原初光化学反应的影响.结果表明:一天内,随着光、温的增强,金冠苹果果皮在12:00—14:00存在较严重的光抑制.O-J-I-P荧光诱导曲线在300μs处的相对可变荧光(Wk)几乎没有变化,说明果皮PSⅡ的放氧复合体(OEC)的活性在一天当中没有受到强光和高温的伤害;但是果皮捕获的激子将电子传递到电子传递链中QA-下游电子受体的概率(Ψo)从8:00—12:00逐渐下降,说明金冠果皮PSⅡ反应中心受体侧的功能受到抑制.强光降低了果皮单位面积上有活性的反应中心(RC/CS)的数量,导致单位反应中心吸收的光能(ABS/RC)增加.果皮的光化学反应(TRo/RC)不能完全利用所吸收的光能,使单位反应中心的热耗散(DIo/RC)增加.伴随着光抑制的出现,苹果果皮叶黄素库的脱环化比例增加,表明强光下,果皮启动了叶黄素循环机制,来耗散过剩光能,以减轻过剩光能对光合机构的进一步伤害;一天中,光强和温度的增加均可加重果皮的光抑制程度,但光强对果皮的影响程度显著大于温度对果皮的影响.
关键词： 苹果 果皮 光抑制 原初光化学反应 叶黄素循环 光谱反射
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苹果基因邻近未知序列的PCR扩增方法
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：利用已知基因序列设计3个巢式PCR引物p14、p15和p16,然后设计3'端为常见酶切位点、5'端为随机引物序列p17的9个酶切位点引物。用p14外引物与9个酶切位点引物进行第1轮PCR扩增,其中前5个反应采用较低的退火温度,目的是将酶切位点引物的5'端序列引入到PCR产物中,其余反应则以此PCR产物为模板采用较高的正常退火温度进行,目的是为了使整个酶切位点引物能稳定地结合到最初反应形成的产物上。为提高PCR产物的特异性和产量,用p15和p16引物分别与p17引物配对进行第2轮和第3轮PCR扩增,电泳检查发现PCR产物条带后进行纯化和测序。为保证序列的正确性,利用测得的DNA序列再设计新引物f3x,将f3x与p14(或p15)配对、直接用提取的DNA为模板进行PCR扩增和测序。利用此方法成功地获得了苹果FPPS基因邻近的启动子序列528bp和5'UTR序列142bp,并已在GenBank注册(登录号FJ263960),利用Blastn发现这是GenBank中首次发表苹果(MalusdomesticaBorkh.)法尼基焦磷酸合酶基因(FPPS)启动子序列。
关键词： 苹果 基因 邻近序列 酶切位点引物 法尼基焦磷酸合酶 启动子
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苹果α-法尼烯合酶基因组结构和序列的多态性分析
《园艺学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：通过设计引物进行PCR扩增、测序、拼接序列,以及与GenBank中的cDNA序列(登录号AY182241)进行比对,获得α-法尼烯合酶基因(AFS)的基因组序列和内含子/外显子结构。获得的AFS基因序列已在GenBank注册(登录号DQ901739),它有6个内含子和7个外显子,编码一个大小为576个氨基酸的蛋白质。间隔外显子的6个内含子相位分别是0、1、2、2、0、0,其大小分别是108、113、>1000、125、220和88bp,7个外显子的推导氨基酸序列大小分别是57、89、127、73、48、83和99。编码的蛋白质中有3个序列模式(motif),RR(X8)W模式的编码基因序列在基因5′端的外显子1上,RxR模式和DDxxD模式的编码基因序列在外显子4上。将获得的AFS基因序列与GenBank中的cDNA序列(登录号AY523409)进行比对,结果发现两序列间有6个单核苷酸多态性,其中4个引起氨基酸突变。有意义的是,1个氨基酸突变(291R→G)发生在RxR模式上,此氨基酸突变以及其它突变是否与苹果α-法尼烯合成能力和虎皮病发生能力有关,值得进一步探讨。
关键词： 苹果 α-法尼烯合酶 基因组DNA 多态性 虎皮病
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提高苹果基因转化效率的研究
《果树科学 》 2000 北大核心 CSCD
摘要：采用根瘤农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）强株系ＥＨＡ１０５（ｐ３５ｓＧＵＳ－ｉｎｔｒｏｎ）研究了影响‘皇家嘎拉’苹果（Ｍａｉｎｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ．）外植体的β-葡萄糖醛酸酶（ＧＵＳ）基因的瞬时、稳定表达水平和转基因植株的再生。证明在培养基生长素（ＩＢＡ、ＮＡＡ）存在的条件下，外植体的ＧＵＳ基因的瞬时表达水平提高了３－４倍，而共培养两周后稳定表达水平提高２倍以上，产生９．８个ＧＵＳ愈伤组织表达区域。白化处理促进外植体的基因转化，白化处理的新梢顶端第一节间外植体ＧＵＳ表达区域比常用的叶片外植体高４倍。在生长素存在的条件下 ２％外植体获得了转基因植株。Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ＢｌｏｔＤＮＡ杂交和组织化学染色分析证明ＧＵＳ基因已整合到苹果的染色体上，并得以表达。
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培育苹果转基因植株的研究
《落叶果树 》 2000
摘要：采用“皇家嘎拉”苹果（ Ｍａｌｕｓ ｄｏｍｅｓｔｉｃａ Ｂｏｒｋｈ） 白化茎段外植体，通过根癌农杆菌（ Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕ ｍｔｕ ｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＥＨＡ１０５（ｐ３５ＳＧＵＳｉｎｔ） 介导，证明了培养基中存在生长素可促进基因转化，转化效率比对照提高２倍以上。将外植体与ＥＨＡ１０１（ｐ３５ＳＧＵＳ） 株系在含有生长素的培养基中共培养，获得了转基因植株。采用ＰＣＲ 分析和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｌｏｔ 核酸杂交，确定ＧＵＳ 基因已整合到苹果植株的染色体上。组织化学染色确定了ＧＵＳ 基因在植株体内的表达。
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