科研产出
MDCK细胞ISG15基因的克隆表达及抗病毒活性分析
《浙江农业学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：为了解ISG15基因体外抗病毒机制,应用RT-PCR方法扩增了MDCK细胞的ISG15基因,经测序分析,该基因序列与Gen Bank中登录的犬属ISG15基因序列相似性为99%。将该基因亚克隆至p ET-28a载体构建出重组原核表达质粒p28a-M15;工程菌p28a-M15/BL21经IPTG诱导表达,获得了约22 k D的重组目的蛋白,重组蛋白经Ni2+柱层析纯化。于H9N2亚型禽流感病毒S2株感染前后在MDCK细胞中定量加入纯化的ISG15蛋白,结果显示,病毒感染MDCK细胞前加入ISG15蛋白可以抑制病毒的复制,但病毒感染后添加该蛋白则促进了病毒的复制。
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基因调控型质粒串联表达猪α、γ干扰素及其体外抗猪繁殖与呼吸综合征病毒活性研究
《畜牧与兽医 》 2013 北大核心
摘要：利用兔β-Globin Intron II基因调控序列,改造真核表达载体pVAX1,构建基因调控型质粒,将猪α干扰素(pIFN-α)和γ干扰素(pIFN-γ)进行串联表达。结果表明,重组质粒pMVAX1-pIFN-α/γ表达的IFN活性相比pVAX1-pIFN-α提高了100倍,比pVAX1-pIFN-γ提高了1 000倍。体外抗病毒活性表明,pIFN-α/γ的量为100 U(稀释度1∶106)以上时,对100 TCID50的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)具有明显的抑制效果,说明串联表达的pIFN-α和pIFN-γ具有高效抗PRRSV效果。本研究将为PRRS的预防治疗提供新的思路和方法。
关键词： 猪α干扰素 猪γ干扰素 猪繁殖与呼吸综合征病毒 抗病毒活性
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鸡IFN-α基因的多点突变及其在毕赤酵母中的高效表达
《中国家禽 》 2008 北大核心
摘要：根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,在不改变其编码的氨基酸序列的前提下,对鸡IFN-α序列进行PCR介导的定点突变优化,将鸡IFN-α成熟肽序列中136～143位相近的4个Arg密码子和N端的6个稀有密码子突变为毕赤酵母高表达优越密码子,构建了含正确突变和未突变序列的克隆载体pMD-IFNm、pMD-IFN和酵母表达载体pPICZ-IFNm、pPICZ-IFN,电击转化毕赤酵母X-33菌株,经筛选、鉴定表明鸡IFN-α基因已整合到酵母基因组中。通过表达产物的抗病毒活性测定,筛选出突变与未突变高表达酵母转化子各1株。经密码子优化的突变重组酵母菌株PP-IFNm于BMMY培养基中诱导72h上清中抗病毒活性单位可达410U/mL,其活性比未优化重组酵母株PP-IFN(48.33U/mL)提高了约10倍。
关键词： 鸡IFN-α基因 多点突变 毕赤酵母 高效表达 抗病毒活性
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重组鲁西黄牛α干扰素融合蛋白的表达及其抗病毒活性研究
《生物工程学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：通过PCR从鲁西黄牛(Yellowcattle)基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后在MDBK/VSV上的活性为5×105u/mg。重组牛IFN-α(rBoIFN-α)对牛轮状病毒(BRV)有一定的抑制作用,抗BRV病毒活性为1.5×105u/mg。结果显示从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,并实现了高效表达,获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。
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鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定
《山东农业科学 》 2006
摘要：本试验将已构建的鸡α-干扰素重组酵母表达质粒pPIC-ChIFNα克隆至Pichia pastorisGS115基因组中,从阳性转化子中筛选出2株能高效表达鸡α-干扰素的重组酵母菌株,并对表达产物进行了纯化和抗病毒活性的测定。结果表明,Pichia pastoris表达的重组ChIFNα具有较高的抗病毒活性,其活性单位为570×104U/ml,结合蛋白定量计算其比活性为2 980×104U/mg。
关键词： 鸡α-干扰素成熟蛋白 Pichiapastoris 基因表达 分离纯化 抗病毒活性
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