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鸡IFN-α基因的多点突变及其在毕赤酵母中的高效表达

文献类型： 中文期刊

作者： 宋敏训 1 ; 吴静 2 ; 史玉颖 2 ; 汪明 1 ;

作者机构： 1.中国农业大学动物医学院农业部预防兽医学重点开放实验室

2.山东省农科院家禽研究所禽病诊断与免疫重点实验室

关键词： 鸡IFN-α基因;多点突变;毕赤酵母;高效表达;抗病毒活性

期刊名称： 中国家禽

ISSN： 1004-6364

年卷期： 2008 年 30 卷 18 期

页码： 11-15

收录情况： 北大核心

摘要： 根据毕赤酵母基因的密码子选择偏爱性,在不改变其编码的氨基酸序列的前提下,对鸡IFN-α序列进行PCR介导的定点突变优化,将鸡IFN-α成熟肽序列中136～143位相近的4个Arg密码子和N端的6个稀有密码子突变为毕赤酵母高表达优越密码子,构建了含正确突变和未突变序列的克隆载体pMD-IFNm、pMD-IFN和酵母表达载体pPICZ-IFNm、pPICZ-IFN,电击转化毕赤酵母X-33菌株,经筛选、鉴定表明鸡IFN-α基因已整合到酵母基因组中。通过表达产物的抗病毒活性测定,筛选出突变与未突变高表达酵母转化子各1株。经密码子优化的突变重组酵母菌株PP-IFNm于BMMY培养基中诱导72h上清中抗病毒活性单位可达410U/mL,其活性比未优化重组酵母株PP-IFN(48.33U/mL)提高了约10倍。

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