文献类型： 中文期刊

作者： 张永红 ¹ ; 王长法 ¹ ; 杨少华 ¹ ; 高运东 ¹ ; 王洪梅 ¹ ; 李景鹏 ² ; 仲跻峰 ¹ ;

作者机构： 1.山东省农业科学院奶牛研究中心

2.东北农业大学生命科学学院

关键词： 黄牛;α干扰素基因;表达;抗病毒活性

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2007 年 23 卷 04 期

页码： 175-179

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 通过PCR从鲁西黄牛(Yellowcattle)基因组DNA中克隆了α干扰素(BoIFN-α)基因,并插入到pET32a+中,构建成重组原核表达质粒pET32a+/BoIFN-α,进行测序和诱导表达。测序结果表明,鲁西黄牛IFN-α基因全长498个核苷酸,含一个开放阅读框(ORF),编码166个氨基酸的成熟蛋白,与已报道的牛α干扰素C亚型氨基酸组成同源性为97.6%。表达产物经SDS-PAGE分析,表达出40kD的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的26.7%。表达产物经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化,纯化产物进行复性后在MDBK/VSV上的活性为5×105u/mg。重组牛IFN-α(rBoIFN-α)对牛轮状病毒(BRV)有一定的抑制作用,抗BRV病毒活性为1.5×105u/mg。结果显示从鲁西黄牛中克隆了IFN-α基因的一种新亚型,即BoIFN-αC2,并实现了高效表达,获得了具有较高抗病毒活性的重组干扰素产物,为重组牛干扰素的开发奠定了基础。