文献类型： 中文期刊

作者： 赵鹏伟 ¹ ; 吴家强 ² ; 杜以军 ² ; 李俊 ² ; 孙文博 ² ; 丛晓燕 ² ; 时建立 ² ; 彭军 ² ; 于江 ² ;

作者机构： 1.青岛农业大学动物科技学院

2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室

关键词： 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒SX-1株;Nsp1;突变体构建;活性鉴定

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2013 年 40 卷 06 期

页码： 1-6

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)SX-1株非结构蛋白Nsp1的真核表达质粒,并对Nsp1蛋白锌指结构1(ZF1)进行定点突变,检测其在真核细胞中的表达活性。利用TRIzol法提取总RNA,RT-PCR扩增Nsp1目的基因,经双酶切构建pCI-neo-Nsp1真核表达质粒后对Nsp1蛋白锌指结构1的8C、10C、25C和28C的4个位点进行定点突变,成功获得分别突变为A和S的8个突变体。转染HeLa细胞,通过间接免疫荧光方法(IFA)和Western blotting检测Nsp1蛋白的活性。IFA结果显示,Flag抗体检测时蛋白质主要分布在细胞质和细胞核中,Myc抗体检测时蛋白质主要分布在细胞核中。Western blotting结果显示,Flag抗体检测时,S突变体出现大小约为44和20ku条带,A突变体出现约为44ku条带;Myc抗体检测时,S突变体出现大小约为44和27ku条带,A突变体出现大小约为44ku条带。试验结果表明,本试验成功构建了Nsp1突变体的真核表达质粒,证实其能在真核细胞中表达,为进一步研究Nsp1蛋白的锌指结构是否对机体Ⅰ型IFN产生起下调作用提供基础。