文献类型： 中文期刊

作者： 张琳 ¹ ; 马利 ² ; 丁雅苓 ³ ; 逯茂洋 ⁴ ; 胡北侠 ⁵ ;

作者机构： 1.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室

2.山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东农业大学动物科技学院青岛维德康欣集团公司

3.山东省农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室齐鲁动物保健品有限公司

4.山东农业科学院畜牧兽医研究所山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室中国农业大学动物医学院重庆市公安局

5.山东省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 传染性支气管炎病毒;环介导等温扩增;荧光显色;钙黄绿素

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2012 年 10 期

页码： 38-44

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立基于荧光显色的可视化禽传染性支气管炎病毒(IBV)环介导等温扩增(LAMP)检测体系,为IBV的快速临床检测提供有力的技术支持。【方法】根据NCBI中收录的IBV 5a+5b基因的8个区域设计了3对LAMP引物,通过对反应体系各组分和条件的优化,建立IBV LAMP检测方法,并对该方法的特异性和敏感性进行验证。分别用SYBR Green I和一定浓度比的钙黄绿素/锰离子混合物作为显色剂,对IBV LAMP检测结果进行可视化判定。应用该检测体系和PCR方法对临床送检的60份样品同时进行检测,比较2种方法的阳性检出率。【结果】成功建立了IBV LAMP检测方法,该方法能够在等温(63℃)条件下1h内完成反应,具有良好的敏感性和特异性,最低可以检出1拷贝/μL的阳性重组质粒,比普通PCR方法敏感100倍,而对其他病毒检测结果均为阴性。应用SYBR Green I和钙黄绿素/锰离子显色时,阴阳性样品均有强烈的颜色对比,其中0.05mmol/L钙黄绿素与0.6mmol/L锰离子混合液可以用于LAMP扩增产物的判断,其结果与琼脂糖凝胶电泳结果一致。在对60份临床样本的检测中,LAMP和PCR方法检测出的阳性样本数量分别为49份和42份。【结论】建立了基于荧光显色的IBVLAMP检测方法,该方法具有在科研机构、基层实验室特别是检测现场推广和应用的潜力。