文献类型： 中文期刊

作者： 吴香菊 ¹ ; 李芳韬 ¹ ; 陈蕾 ² ; 丛晓燕 ² ; 孙文博 ² ; 于江 ² ; 陈智 ² ; 郭立辉 ² ; 吴家强 ² ;

作者机构： 1.山东农业大学动物科技学院

2.山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室

关键词： Marc-145;CD163;稳定细胞系

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2015 年 42 卷 08 期

页码： 2074-2080

收录情况： 北大核心

摘要： 试验旨在构建一株高效表达猪CD163(pCD163)的Marc-145细胞系,为猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的临床分离和疫苗生产奠定基础。根据GenBank中序列设计引物从猪肺泡巨噬细胞(PAM)中扩增pCD163基因,将其插入真核表达载体pCI-neo构建真核表达质粒pCIpCD163,将该重组质粒转染Marc-145细胞,通过G418筛选、单克隆化并扩大培养筛选获得表达pCD163的Marc-145细胞系,IFA、Western blotting鉴定其表达情况。IFA结果显示,构建的pCD163-Marc细胞系中荧光明显亮于普通Marc-145细胞;Western blotting结果显示,pCD163-Marc细胞系中CD163蛋白表达量约为对照Marc-145细胞中CD163蛋白表达量的8.7倍。且该细胞系可稳定传至20代,各代次之间表达量无差异。证明高效表达猪CD163的Marc-145细胞系构建成功。