科研产出
小麦基因转化研究进展
《麦类作物学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：为了给小麦遗传转化研究提供参考,总结和分析了小麦基因转化的最新研究进展,并针对存在的主要问题提出了今后的研究方向。目前在小麦表达载体构建中普遍采用Ubi和在35S基础上改造而来的启动子序列,使用的报告基因主要有gus、uidA、gfp和Cl/LC等,选择基因主要有bar、nptII、manA(pmi)、Cah、gst27、mopat、popat、CP4和GOX,筛选剂一般选用Bialaphos、Glufosinate、G418和Glyphosate等。小麦基因转化的主要受体为幼胚及其愈伤组织,转化方法主要有花粉管通道法、基因枪法和农杆菌介导法。受体类型、表达载体序列组成和基因转化方法是影响小麦基因转化效率的主要因素。
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甜瓜反义酸性转化酶基因对甜瓜的遗传转化
《园艺学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：利用子房注射法将甜瓜反义酸性转化酶基因导入厚皮甜瓜自交系‘01-3’果实,应用PCR和Southern Blot对后代进行分子鉴定。结果表明,330株甜瓜转化植株中,有2株为阳性转基因植株,转化率约为0·6%。进一步研究发现,T0代转基因甜瓜植株生长势减弱,果实比对照小30%左右,但可溶性糖含量比对照提高了52%。PCR和PCR-Southern Blot鉴定表明,T0-1的自交后代没有基因丢失,反义酸性转化酶基因已在转基因植株中稳定遗传。T1代转基因植株生长势也明显减弱,但成熟果实可溶性总糖含量提高了26%,蔗糖含量比对照提高了2·5倍,果糖和葡萄糖含量略有降低,酸性转化酶活性比对照明显降低。这些结果表明,反义酸性转化酶基因通过降低酸性转化酶活性,调控了甜瓜果实蔗糖代谢过程,改变了甜瓜果实糖分组成,同时抑制了植株生长。
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花生子叶遗传转化再生体系影响因素的研究
《花生学报 》 2007
摘要：本试验选用子叶为外植体研究了影响植株再生和遗传转化的因素。结果表明,细胞分裂素(6-BA)5.00 mg/L+(2,4-D)1.50 mg/L的诱导培养基子叶外植体丛生芽诱导率最高,分别达89.67%和83.33%。遗传转化影响因素结果表明,菌液OD600为0.5-0.7、侵染时间10min、共培养时间3d、每50mL菌液添加烟草提取物1.0mL可获得较好的转化效果。抗生素对芽分化率影响的研究结果表明,当头孢唑林钠(Cef)250 mg/L+羧苄青霉素(Carb)250-500 mg/L时效果最好,不但可以完全抑制农杆菌生长,而且有较高的芽诱导率。
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山菠菜胆碱单加氧酶基因对棉花的遗传转化和耐盐性表达
《作物学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：胆碱单加氧酶(CMO)是渗透保护剂甜菜碱生物合成的关键酶之一。以棉花(Gossypium hirsutium L.)泗棉3号的下胚轴切段为外植体,利用农杆菌介导法将克隆自山菠菜(Atriplex hortensis)的AhCMO基因导入其中,通过组织培养胚状体发生途径获得转基因再生植株。以0.5%卡那霉素对再生苗筛选后,PCR检测抗卡那霉素棉苗确认阳性转化株,Southern和Northern杂交结果进一步证实外源基因已导入棉花并得到表达。在温室盆栽条件下,于2片真叶期对转AhCMO基因棉花及其转化受体泗棉3号施加0.5%的NaCl胁迫,15d后发现其光合作用和植株生长被显著抑制,非转基因棉花泗棉3号的株高、鲜重和光合速率分别降低了57.6%、65.6%和69.9%,而转AhCMO基因的棉株分别降低了37.3%、54.6%和47.9%。转AhCMO棉花所受盐害程度显著小于非转基因的棉株,说明AhCMO基因的导入和表达提高了转基因棉花的耐盐性。
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虾青素合成关键酶基因bkt植物表达载体的构建及对玉米的遗传转化
《中国农学通报 》 2006
摘要：虾青素是一种具有极强抗氧化活性的类胡萝卜素,具有广泛的应用价值。β-胡萝卜素酮化酶(Bkt)是由玉米黄素合成虾青素生物合成途径中的关键酶。采用LaTaqDNA聚合酶用PCR的方法从pET-28a(+)bkt中扩增得到bkt基因,用bkt基因替换pBI221中的GUS基因形成含有CaMV35S启动子和NOS终止子的bkt基因表达盒,然后插入植物表达载体pCAMBIA1301的多克隆位点,最终获得带有选择标记和报告基因的植物表达载体pCAMBIA1301-bkt。通过农杆菌LBA4404介导将其转化进入玉米自交系齐319,转化后的愈伤经GUS组织化学染色分析表明bkt基因已经转入玉米胚性愈伤组织。
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分子生物学技术在甘薯中的应用
《分子植物育种 》 2006 CSCD
摘要：甘薯是重要的粮食作物,它的遗传背景复杂,分子生物学研究进展落后于水稻、玉米等作物。分子标记技术主要应用于甘薯的遗传图谱构建、遗传多样性分析以及亲缘关系分析等方面。目前,已经构建了数张遗传图谱,亲缘关系分析表明三浅裂野牵牛I.trifida与甘薯有很紧密的亲缘性。基因克隆技术已经应用于甘薯在抗逆、品质以及块根发育等相关基因的分离,为甘薯的分子育种带来了有益的目的基因。在栗子香、新大紫等甘薯品种有转基因的报道,采用农杆菌介导的方法,已经取得了少量的转基因植株。
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