科研产出
花生中DREB类转录因子PNDREB1的克隆及鉴定
《作物学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：脱水响应元件结合因子(DREB)是一类对多个抗逆相关基因表达起调控作用的植物特有的转录因子,在植物抗逆能力综合改良方面具有重要作用。本研究通过筛选花生未成熟种子的cDNA文库,分离到一个DREB类基因——PNDREB1(FM955398)。该基因序列长度为687bp,推测编码蛋白含有229个氨基酸残基,相对分子量为24.7kD,理论等电点为5.97,与其他物种中该类转录因子序列同源性较高。利用酵母单杂交系统,对花生PNDREB1与DRE元件的特异识别和结合能力及其C-末端转录激活活性进行检测,显示,转入含有该基因及阳性对照基因的载体均可使酵母菌株正常生长,且具有显色反应,而转入空载体的酵母菌株不能生长,证明基因PNDREB1中的AP2结构域具有和DRE元件特异性结合的能力;同时,只有转入含有该基因C-末端片段及阳性对照基因的载体可使酵母菌株正常生长,并具有显色反应,而转入空载体的酵母菌株不能生长,说明其C-末端片段具有转录激活活性,该基因为DREB类转录因子。基因表达模式分析显示,PNDREB1为组成型表达,且被低温强烈、迅速诱导表达,并对干旱胁迫也有一定程度的响应,但对高盐和ABA处理没有响应。
关键词： 花生 DREB类转录因子 PNDREB1 酵母单杂交 表达模式 低温 干旱
全文链接
请求原文
花生野生近缘种生物素羧基载体蛋白基因的克隆与结构分析
《华北农学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：根据栽培花生鲁花14生物素羧基载体蛋白基因accB1和accB2cDNA序列设计基因特异引物,克隆了花生野生近缘种Arachis duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei的accB1和accB2cDNA序列。序列分析表明,accB1和accB2在栽培花生和野生近缘种中高度保守,氨基酸序列一致性分别高于98.6%和97.5%。A基因组A.duranensis、A.rigonii和B基因组A.batizocoi、A.hoehnei的accB1和accB2的氨基酸序列存在差异,但与基因组来源无关。花生野生近缘种A.duranensis、A.rigonii、A.batizocoi和A.hoehnei accB2基因组序列分析表明,栽培花生和野生近缘种的accB2的基因结构相同。A基因组的A.duranensis与B基因组的A.batizocoi和A.hoehnei的accB2基因组DNA核苷酸序列一致性分别为98.9%,98.8%,而A基因组的A.rigonii与A.duranensis、A.batizocoi和A.hoehnei的序列一致性分别为93.5%,93.6%,93.4%。研究表明,生物素羧基载体蛋白基因在栽培花生及野生近缘种中非常保守。
全文链接
请求原文
农杆菌介导轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化花生的研究
《作物学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：选用鲁花14与花育23花生品种,通过农杆菌介导开展了轮状病毒抗原蛋白VP4基因遗传转化研究,从转化植株中随机选取26株表现Kan抗性植株进行nptII基因的PCR检测,结果有22株能扩增出620bp左右的nptII基因条带,阳性率约为84.62%。提取nptII基因显示为阳性的植株叶片DNA作模板,用VP4基因特异引物进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳分析,所有nptII基因阳性的植株均扩增出了约2350bp的特异性条带,而野生型没有。对部分转基因植株进一步进行PCR-Southern杂交和Southern杂交分析,发现转基因植株中出现了阳性杂交信号,表明VP4基因的确已经整合到花生的基因组中,并且是1~2个拷贝。用RT-PCR分析了11株转G1VP4基因的植株,证明插入鲁花14中的VP4基因已经正常转录,利用Westernblot方法检测筛选到的4株转基因花生,分别提取其蛋白,在30kD处出现特异性蛋白条带,这为获得转基因创新种质材料奠定了基础。
全文链接
请求原文
花生品种鉴定技术研究进展
《花生学报 》 2006
摘要：花生品种鉴定技术在良种保纯、新品种保护工作以及花生属分类学、花生育种后代选择研究中具有重要作用。本文综述了目前国内外花生品种鉴定的主要技术方法,分析了花生品种的形态学鉴定、同工酶和种子蛋白质电泳技术、DNA分子标记技术的研究和应用情况,讨论了花生品种鉴定技术的发展前景。
全文链接
请求原文
基于已有序列信息快速获得花生目的序列的方法(英文)
《花生学报 》 2004
摘要：提出了一套基于已有DNA序列信息快速获得花生目的序列的技术流程。运用花生籽仁未成熟叶片简单预处理PCR技术,根据一个种子中特异表达的基因cDNA序列设计特异性引物,用TaqDNA聚合酶进行PCR扩增,4个花生基因型中有3个得到预期长度的产物。随后取其中育种品系02 B4籽仁未成熟叶片,简单预处理后采用PyrobestDNA聚合酶作高保真扩增,得到产物后直接测序。结果表明,该基因片段与已报道的花生PSC33羽扇豆球蛋白cDNA序列表现出高度同源性。本研究为分离其编码区上下游序列奠定了基础。
全文链接
请求原文
