科研产出
鲁西黄牛IFN-α基因克隆及其真核表达质粒的构建
《动物医学进展 》 2006
摘要：为研发牛α干扰素制剂,根据已发表的牛α干扰素基因序列设计一对引物。提取黄牛血液中白细胞基因组DNA,PCR扩增出α干扰素基因,并克隆到pMD18-T载体。测序结果表明,扩增片段含有570bp核苷酸,编码189个氨基酸,与已报道的牛α干扰素亚型氨基酸序列同源性在93.1%~95.2%之间。该基因与真核表达载体pcDNA3.1+相连,构建真核表达质粒,为牛α干扰素的临床应用奠定了基础。
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美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位基因表达及其产物的纯化
《动物医学进展 》 2006
摘要：对原核中以包涵体形式高效表达的美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位区段进行了变性、复性与纯化研究。将美洲型PRRSV重组质粒pGEX-6P-1-N转化入E.coliBL21(DE3)细胞中,成功表达了重组蛋白GST-N,超声裂解复性后目的蛋白经GSTrap FF纯化试剂盒纯化后,纯度可达90%以上。将欧洲型PRRSV重组质粒PQE30-N转化入E.coliM15细胞中表达了重组蛋白His-N。超声裂解后目的蛋白经HisTrapHP蛋白纯化试剂盒纯化后,纯度可达95%以上。Western blot结果表明,两种蛋白分别被美洲型和欧洲型PRRSV阳性血清识别。纯化出的大量美洲型与欧洲型PRRSV特异N蛋白抗原表位区段,为PRRSV的鉴别诊断提供了抗原基础。
关键词： 猪繁殖与呼吸综合征病毒 美洲型 欧洲型 N蛋白抗原多肽 原核表达 纯化
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犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达
《中国兽医科技 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank中登录的犬瘟热病毒F基因序列设计了1对引物,以从水貂犬瘟热病毒中提取的RNA为模板,扩增出一约1 000 bp的F基因片段。将PCR产物按相应的阅读框架克隆到原核表达载体pET-32a中,并将重组质粒转化E.coliBL21(DE3),用1.0 mmol/L IPTG在30℃下诱导表达。结果显示,F基因的表达量约占细菌总蛋白的35%。SDS-PAGE电泳显示,表达产物的分子质量约为55 ku,与预计大小相符;经Western-blotting试验进一步证实,该基因获得了正确表达。
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牛生长激素释放因子类似物基因的克隆与表达
《畜牧兽医学报 》 2000 北大核心
摘要：本研究以近期报道的高生物学活性、高代谢稳定性的牛生长激素释放因子类似物 (Ile2 ,Ala15,Leu2 7)bGRF(1- 2 9) -NH2 的氨基酸序列为模板 ,选用大肠杆菌高效表达所偏爱的密码子设计出该基因的全序列。采用化学合成法合成两个 3′末端有 19碱基互补的 80碱基的寡核苷酸片段。并互为模板和引物 ,通过酶促延伸合成完整的bGRF类似物基因 ,克隆于 pT7BlueT Vector中 ,通过蓝 /白筛选和酶切分析确定了阳性克隆。然后将目的基因从 pT7BlueT Vector克隆于pUC18载体中 ,以便多拷贝基因的制备。通过测序证明我们获得了目的克隆。将目的基因首尾串联 ,制备得到的 16拷贝基因在温控启动子PRPL 调控下于大肠杆菌中获得表达
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花生条纹病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达
《花生科技 》 1999 北大核心
摘要：用内切酶Ｂａｍ ＨＩ和ＥｃｏＲＩ将ｐＧＥＭ－ ＳｔＶ 含有的约１１Ｋｂ 大小的ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因切下定向插入到表达质粒ｐＢＶ２２０ 的启动子ＰＲ、ＰＬ的下游，构建了该基因的原核表达载体ｐＢＶ－ ＳｔＶ。ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ凝胶电泳结果表明：ＰＳｔＶ－ ｃｐ 基因在大肠杆菌ＤＨ５α中经温度（４０℃）诱导后，可特异地表达３３ｋＤ蛋白。
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