科研产出
新城疫La Sota疫苗对不同基因型流行株的免疫保护
《浙江农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：选取国内2001—2003年发生的5株NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,克隆其融合蛋白(F)和血凝素—神经氨酸酶(HN)基因。利用F基因为Ⅱ型的疫苗La Sota活疫苗在隔离器中免疫SPF鸡,每7d采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒(NDV)基因Ⅶ流行株潍坊毒SGM01,昌乐毒SCL03,东营毒SKY和莘县毒SSX03;基因为Ⅱ型日照毒SRZ03和基因为Ⅲ型经典强毒F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF鸡对照。每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,观查疫苗的保护性,便于对常规生产中的免疫失败原因进行分析。
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鹅副粘病毒QY分离株的蚀斑纯化及F基因的克隆与序列分析
《浙江农业学报 》 2008 北大核心 CSCD
摘要：将鹅副粘病毒QY分离株蚀斑纯化后,根据已发表的鹅副粘病毒SF02株全基因序列,分别设计合成3对引物,设计合成F基因引物,经RT-PCR方法扩增,克隆入PMD18-T载体,鉴定、测序。测序后拼接得出F基因的全序列长度为1 662 kb,编码553个氨基酸残基,与GenBank下载的几株参考毒株比较F基因编码区的核苷酸序列,发现所测QY株F基因核苷酸序列同源性与参考毒株SF02为98.3%,与LaSota分别为82.4%,同源性分析表明分离株QY与国内的强毒株参考毒株的同源性较高。
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一株新城疫重组强毒的分离鉴定与分子特性分析
《畜牧兽医学报 》 2007 北大核心 CSCD
摘要：从患病蛋鸡中分离出1株新城疫病毒(NDV)SRZ/03,经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型ND病变。蚀斑纯化前、后,MDT分别为55.2和51 h,ICPI为1.7和2.0,IVPI为1.91和2.79,表明属强毒。对其F和HN基因分别克隆测序,进行F基因分型。结果表明SRZ/03属基因Ⅱ型,F蛋白氨基酸裂解位点的序列为112R-R-Q-K-R-F117,与强毒基序完全相同。结合GenBank中发表的其他NDV参考株序列,对F和HN基因推导氨基酸序列进行比较。SRZ/03株与基因Ⅱ型LaSota/46、B1/47、Bingham/87和Texas/48的同源性分别为93.1%、93.0%、94.4%和94.4%;与基因Ⅶ型Taiwan/95、SGM/01和SKY/03的同源性分别为92.2%、92.8%和92.8%;与基因Ⅲ型F48E9/48的同源性为91.2%。然而,SRZ/03株F蛋白前210个氨基酸与基因Ⅱ型LaSota/46和Texas/48的同源性较高,达96.7%和98.1%,后343个氨基酸则与Taiwan/95、SGM/01等毒株的同源性较高,达95.7%~97.4%,推测该株为重组株。此外,SRZ/03株与Taiwan/95、SGM/01等毒株的HN氨基酸同源性高达95.8%~97.6%,显著高于与LaSota/46、B1/47、Bingham/87、Texas/48和F48E9/48的87.2%~89.2%。
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一株信鸽新城疫强毒的分离鉴定和分子特性分析
《农业生物技术学报 》 2007 CSCD
摘要：从发病信鸽的体内分离到1株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)PB9601,经病毒蚀斑纯化后动物回归试验可产生典型的NDV病变,其鸡胚平均死亡时间(MDT)、一日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)、六周龄鸡静脉接种的致病指数(IVPI)分别为50.5h、1.65和2.36,表明NDV为强毒。对其融合蛋白(F)和血凝素神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,发现F蛋白多肽裂解位点的氨基酸基序为112 KRQKRF 117,符合鸽源NDV强毒序列。F基因分型及同源性比较显示:PB9601与YN-03、TW-98等鸽源毒株属于Ⅵ型,其F基因与疫苗株基因Ⅱ型LaSota的氨基酸同源性为88.6%,与疫苗株基因Ⅰ型V4的氨基酸同源性为91.0%,与传统强毒基因Ⅸ型F48E9的氨基酸同源性为90.6%;与国内鸽分离株GX-05、YN-03和TW-98的氨基酸同源性分别为92.1%、95.5%和98.6%;与国外鸽分离株Capital3-97、Tigre6-99、1166-00、IT-227-82和2736-00的同源性分别为93.3%、91.9%、94.6%、95.1%和93.6%。HN基因氨基酸同源比较显示:PB9601与LaSota、F48E9和V4的氨基酸同源性分别为87.2%、89.2%和87.6%;与国外鸽分离株1166-00、IT-227-82和2736-00的同源性为93.7%、95.5%和92.3%。PB9601与国内外鸽分离株、LaSota、F48E9和V4相比,具有明显的地域性和种属性。
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一株基因Ⅱ型新城疫强毒株的分子特性
《微生物学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：从患病肉鸡群分离到一株新城疫病毒(NewcastleDiseasevirus,NDV)SQZ04。经蚀斑纯化后接种40日龄SPF鸡可诱发典型病变。经蚀斑纯化前和后的MDT为50·5h和51·2h,ICPI为2·0和1·92,IVPI为2·8和2·68,表明属强毒株。但F基因分型表明SQZ04属基因Ⅱ型,而且其与已知基因Ⅱ型的疫苗株LaSota、B1和Texas48的同源性分别为99·3%、98·7%和96·9%,显著高于与基因Ⅶ或Ⅸ型强毒株的同源性88·3%~88·6%或91·3%~92·1%。这是国内第一株属于基因Ⅱ型的NDV强毒株。SQZ04F多肽氨基酸裂解位点的序列为111GGRQGRL117,与弱毒株序列完全相同,这也是国内外首次报道具有这一氨基酸序列的强毒野毒株。然而,SQZ04株与其他已知强毒株的HN氨基酸同源性高达95·3%~97·3%,显著高于与弱毒株LaSota等的同源性87·8%~89·5%。
关键词： 新城疫病毒 毒力 基因型 氨基酸 F基因 HN基因
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新城疫病毒HN和F基因遗传变异相关性的研究
《微生物学报 》 2006 北大核心 CSCD
摘要：选取国内1999~2005年发生的NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,对其融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因分别进行克隆测序,结合在GenBank中发表的具有F和HN基因的NDV序列,利用DNAStar软件,对其不同毒株的F或HN基因片段和全长、F和HN基因全长分别进行遗传变异的研究,利用统计学软件SPSS8.0进行同源性相关分析。结果表明:不同NDV毒株F或HN基因片段与其全长之间,核甘酸r≥0.973,氨基酸:0.911≤r≤0.968,遗传变异高度相关,但F与HN基因全长之间核甘酸的遗传变异呈现弱相关(r=0.312)。国内NDV野毒株之间HN核甘酸高度同源(同源率97%以上),而与La Sota同源率仅为79.2%~80.7%,且显示出明显的地域性。
关键词： 新城疫病毒 F基因 HN基因 同源性 遗传变异 相关性
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犬瘟热病毒水貂分离株F基因的克隆及原核表达
《中国兽医科技 》 2005 北大核心 CSCD
摘要：根据GenBank中登录的犬瘟热病毒F基因序列设计了1对引物,以从水貂犬瘟热病毒中提取的RNA为模板,扩增出一约1 000 bp的F基因片段。将PCR产物按相应的阅读框架克隆到原核表达载体pET-32a中,并将重组质粒转化E.coliBL21(DE3),用1.0 mmol/L IPTG在30℃下诱导表达。结果显示,F基因的表达量约占细菌总蛋白的35%。SDS-PAGE电泳显示,表达产物的分子质量约为55 ku,与预计大小相符;经Western-blotting试验进一步证实,该基因获得了正确表达。
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