科研产出
一种适宜拟南芥PCR检测的DNA提取方法(摘要)(英文)
《Agricultural Science & Technology 》 2010
摘要：[目的]介绍一种适于拟南芥PCR检测的DNA快速提取方法。[方法]通过对常规DNA提取方法的改进(省去液氮研磨和苯酚提取的步骤),获得可以快速大批量地提取拟南芥DNA样品的方法。于1.5ml Eppendorf管内加入400μl DNA提取液[内含200 mmol/LTri(pH值7.5),25 mmol/LEDTA(pH值8.0),250 mmol/LNaCl,0.5% SDS(W/V)],剪取拟南芥叶片材料少许(1片以下)加入400μl DNA提取液,用微型研磨棒将叶片捣碎至溶液成绿色,放置3 ～5 min;加入400μl氯仿/异戊醇(体积比24:1),混合均匀,12 000 r/min离心5 min;取上清液至另一1.5 ml Eppendorf管内,加入300μl异丙醇,颠倒混合均匀,室温下放置5 min,12 000 r/min离心5 min;弃去上清液,以70%乙醇漂洗,放置晾干,加入100μl灭菌超纯水溶解,4℃放置备用。以随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系为样品进行验证。[结果]经过琼脂糖凝胶电泳及紫外吸收检测,DNA样品完整且污染少,PCR扩增目的片段结果良好,适于作为PCR反应的模板。经过对随机抽取的拟南芥转基因株系和突变株系的PCR检测,阳性植株目的基因扩增条带清晰,无假阳性,试验结果理想。[结论]该方法适用于拟南芥DNA样品的快速提取、PCR检测及拟南芥突变体筛选工作。
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冬季拟南芥土培室与大棚培养技术的对比研究
《山东农业科学 》 2010
摘要：拟南芥是广泛用于遗传学和生物学研究的模式植物,但其对环境条件的要求比较高,致使在简陋条件下难以培养成功。本试验报道了在简陋条件下在室内人工光照和大棚内培育拟南芥的方法,对培养基质、育苗方法、培养条件?移栽管理等作了详细介绍。
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拟南芥和烟草幼嫩种子RNA不同提取方法的比较
《中国农学通报 》 2009 北大核心
摘要：拟南芥和烟草在植物分子生物学研究中都占有非常重要的地位,为了后续试验的顺利进行,欲探索适合提取拟南芥及烟草幼嫩种子总RNA的经济快捷的方法。采用4种方法分别对拟南芥和烟草幼嫩种子的总RNA进行了提取和分析,3种方法所提取的总RNA均能满足一般的下游操作。Trizol法提取的RNA质量低。CTAB-异丙醇法提取的总RNA产量最高,并具有提取步骤少,操作时间短,价格便宜等优点,可用于大量样品提取;百泰克试剂盒提取时间短,可在常温下操作;CTAB-LiCl法提取的总RNA基本无基因组DNA的污染,但是不利于小分子RNA的沉淀。经紫外分光光度计检测,3种方法提取的总RNAOD260/OD280均在1.80~1.97,表明蛋白质及其他有机溶剂的污染很少,OD260/OD230在2.03~2.37,表明盐类小分子的污染也较少;电泳检测28S rRNA和18S rRNA条带清晰,28S rRNA的亮度基本为18SrRNA的2倍,所提取的总RNA质量较高。将CTAB-异丙醇法提取的拟南芥总RNA用于反转录,可获得高质量的cDNA,ds cDNA清晰的分布在100~3000 bp之间。
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改进的拟南芥CAPS标记方法
《农业生物技术学报 》 2005 CSCD
摘要：在模式植物拟南芥(A rabidopsis thaliana)的一种生态型Columbia (Col)中,存在大多数CAPS(切割扩增的多态性序列)标记的标记酶识别位点;而用于分析的酶中,只有37.5% ～47.5% 的酶在Col基因组的扩增区段存在酶识别位点,超过半数的酶在大多数CAPS 标记的开发中无作用。因此,建立了一种改进的开发CAPS 标记的方法。首先进行限制性内切酶分析,筛选出在Col基因组的扩增区段存在酶识别位点的候选酶,然后再在候选酶中筛选CA PS 标记酶;只有在候选酶中找不到CAPS标记酶时,才在其它酶中筛选。应用实验结果表明,即使不知道拟南芥的另两种生态型Landsberg erecta (Ler)和Cape Verde Is-lands(Cvi)的基因组序列,也可利用Col基因组序列开发Ler和Cvi的CAPS 标记,可节约超过50% 酶的费用。这种基于基因组的CAPS(geCA PS)方法在其它植物如水稻(O ryza sativa)和茶叶(Cam ellia sinensis)中的应用进行了讨论。
关键词： 植物 拟南芥 基因组 CAPS(切割扩增多态性序列) 分子标记 限制性内切酶
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