科研产出
鸡呼肠孤病毒基因Ⅰ型变异株的分离鉴定和致病性分析
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为探究导致山东省某肉种鸡场种鸡出现腿病的病原并进行致病性分析，本试验从该肉种鸡场收集病料，进行鸡胚分离、细胞传代、反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测、序列分析、商品肉鸡的致病性试验和免疫攻毒保护试验。结果显示，分离获得1株鸡呼肠孤病毒(ARV),命名为ARV-LL-2020,该病毒对鸡胚的致死率为100%,在鸡肝癌细胞系(LMH)上具有较强的适应性。ARV-LL-2020毒株与经典的S1133疫苗株同属基因Ⅰ型，但两者的主要抗原σC基因的核苷酸同源性为73.6%,氨基酸同源性为59.1%。ARV-LL-2020毒株回归商品肉鸡能复制出与实际生产中完全一致的发病症状。S1133株商品化弱毒活疫苗对ARV-LL-2020毒株的保护率仅有50%。结果表明，导致种鸡腿病的ARV-LL-2020毒株是1株ARV基因I型变异株，目前S1133株商品化弱毒活疫苗无法对其提供完全保护。
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2022年青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌流行情况
《中国兽医杂志 》 2024 北大核心
摘要：为了分析青岛地区鸡源和鸭源多黏菌素耐药大肠杆菌的流行特征,并为多黏菌素的临床应用提供参考依据,本试验于山东省青岛市屠宰场采集鸡源和鸭源粪便样本,通过多黏菌素培养基分离大肠杆菌;分别采用琼脂稀释法、PCR、接合试验和全基因组测序,分析菌株的药物敏感性、耐药基因和毒力因子流行特征、系统发育群、mcr-1 基因可转移性和遗传环境.结果显示,本试验从133 份粪便样本中共分离获得26 株多黏菌素耐药大肠杆菌,总分离率为19.55%(26/133),其中鸭源菌株分离率(24.24%,16/66)高于鸡源菌株(14.93%,10/67).药物敏感性分析结果显示,所有菌株对替加环素和美罗培南全部敏感,对其余测试药物耐药率较高(42.31%~100%),所有分离菌株均存在多重耐药现象,鸡源菌株多重耐药较为分散,而鸭源菌株多重耐药集中于6 和9 重.26 株分离菌株均携带黏菌素耐药基因mcr-1;其余耐药基因携带率介于7.69%~96.15%,tet(B)基因仅在鸡源菌株中携带(20.00%),qnrS基因在鸡源菌株中携带率(30.00%)显著低于鸭源(100%).毒力因子检测发现,tarT、aer、pap 和 neuC 基因在鸡源菌株中的携带率(90.00%、70.00%、50.00%和 30.00%)高于鸭源(62.50%、12.50%、0%和0%).系统发育群结果显示,青岛地区多黏菌素耐药大肠杆菌的主要系统发育群为A组,占比为76.92%.接合试验证实了部分mcr-1 具有可转移性.mcr-1 遗传环境结果显示,mcr-1 上、下游并未发现插入序列.结果表明,mcr-1 仍旧是导致禽源多黏菌素耐药大肠杆菌流行的主要"元凶",但鸡源和鸭源多黏菌素耐药菌株在耐药性、耐药基因和毒力因子检出率等方面表现出一定差异性.因此,mcr-1 在食品动物源细菌中的流行研究和监控仍旧不可忽视.
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肠炎沙门氏菌对雏鸭致病性差异与携带毒力基因相关性研究
《家禽科学 》 2024
摘要：为了探究肠炎沙门氏菌的致病性差异,选择7株鸭源肠炎沙门氏菌开展动物试验,并检测了20种毒力基因(avrA、sipA、sipC、sopA、ssaB、mgtC、misL、orf319、sopB、siiE、pipC、stn、fimA、spvB、spvD、spvC、sitC、sefA、sifA、pefA)在不同菌株中的分布情况,对毒株致病性与携带毒力基因的相关性进行分析。结果表明,所有肠炎沙门氏菌对雏鸭均有致病性,但致病性存在明显差异,致死率为12%～87.5%。毒力基因检测结果显示,不同菌株携带的毒力基因存在差异,其中SE115、SE161菌株携带基因avrA、sipA、sipC、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA、orf319、spvB、spvC、sitC、sefA、sifA、pefA等19种毒力基因;SE60、SE62、SE63菌株除携带上述基因外,还携带spvD基因;SE39菌株携带avrA、sipA、sipC、sopA、sopB、ssaB、mgtC、misL、siiE、pipC、stn、fimA、orf319、sitC、sefA、sifA、pefAd等17种毒力基因;SE56菌株携带avrA、misL、ssaB、spvB、spvD等5种毒力基因。上述结果说明不同菌株的鸭源肠炎沙门氏菌对雏鸭的致病性存在差异,这种差异与其携带毒力基因的数量和种类有一定相关性,此研究结果为进一步研究沙门氏菌的致病机理提供基础理论。
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一株肉种鸡源鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及致病性研究
《中国家禽 》 2024 北大核心
摘要：为探究鸭疫里默氏杆菌对鸡的致病力,试验采集疑似感染鸭疫里默氏杆菌的病死肉种鸡肝脏进行病原的分离培养与纯化、革兰氏染色、生化试验、血清型鉴定、16S rRNA基因测序分析及药敏试验,并将分离菌株在SPF鸡、樱桃谷鸭上进行致病性试验.结果显示:分离到1株血清1型鸭疫里默氏杆菌,该菌株与鸭源、鸡源、鹅源鸭疫里默氏杆菌的相似性分别为99.24%~99.47%、99.16%~99.31%、99.04%~99.20%;该分离株对恩诺沙星、卡那霉素、头孢噻肟、多黏菌素B和多西环素较为敏感,对SPF鸡致病性较弱,可引起一过性精神沉郁和泡沫粪,对樱桃谷鸭有较强的致病性,可引起死亡和严重的纤维素性心包炎、肝周炎和气囊炎.研究表明分离的肉种鸡源RA对鸡致病力相对较弱,结果为临床鸡群感染RA的诊断与防控提供参考.
关键词： 肉种鸡 血清1型鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 致病性
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一株致种鸭瘸腿的肠炎沙门氏菌分离与鉴定
《中国家禽 》 2022 北大核心
摘要：为探究育成期种鸭瘸腿的发生原因，采集病鸭的肝脏、关节进行病原分离，经沙门氏菌stn基因PCR、多重PCR及7对管家基因MLST分析等方法进行鉴定，并对分离菌进行生化试验、药敏试验和SPF鸭致病性试验。结果显示：4份肝脏及关节组织病毒检测为阴性、细菌检测为肠炎沙门氏菌阳性，PCR、MLST及生化试验结果确定分离了一株肠炎沙门氏菌；该分离菌对新霉素和多西环素药物较为敏感；SPF鸭致病性试验结果显示该分离菌具有较强的致病性，可复制出与临床表现一致的纤维素性心包炎、肝周炎症状，感染鸭瘸腿比例为100%，剖检有严重的腿肌干酪样物。研究首次报道了肠炎沙门氏菌感染可引起种鸭瘸腿和严重的纤维素性心包炎、肝周炎、腿肌干酪样物，为育成期种鸭瘸腿的防治提供参考。
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山东省动物源多重高抗大肠杆菌的抗药基因和毒力基因分析
《家禽科学 》 2022
摘要：为了解和掌握山东省动物源大肠杆菌的多重抗药现象,并分析多重高抗菌株中抗药基因和毒力基因的分布和共存情况,从山东省兽医抗药性监测网(Veterinary antibiotic monitoring resistance system,Varms)菌种库中选取动物源大肠杆菌,用琼脂稀释法进行10种抗菌药物的药敏试验,对5重以上的多重抗药性菌株进行抗药谱分析,并选择多重高抗菌株进行MLST分型,采用PCR方法对常见的21种抗药基因和15种毒力基因进行分析.结果显示,5重以上抗药菌株占20%左右,9~10重抗药且最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)远远高于R值的多重高抗菌株32株中,均检测到含有7~13个抗药基因和0~6个毒力基因共存,其中高检出率的β-内酰胺类、喹诺酮类和氯霉素类的抗药基因均为质粒介导;毒力基因以fimC、sitA、iucD和hlyF为主要毒力因子,检出率为40%~90%.兼具抗药性和毒力的菌株造成严重的公共卫生威胁和巨大的食品安全潜在危害.
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肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸提取方法比较与改进
《济南大学学报(自然科学版) 》 2021 北大核心
摘要：为了得到一种高效的肠道集聚性大肠杆菌基因组脱氧核糖核酸(DNA)提取方法,比较OMEGA、天根、宝生物、全式金4种细菌基因组DNA提取试剂盒对肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA的提取效果,并对宝生物、全式金试剂盒提取方法进行优化;测定所提取的基因组DNA的纯度及浓度,并进行基因组完整性检验及特征基因检测。结果表明,使用全式金细菌基因组DNA提取试剂盒提取肠道集聚性大肠杆菌基因组DNA时,通过增加溶菌酶孵育时长至40 min,同时蛋白酶K的用量增加1倍,基因组DNA提取浓度可提高约14.5倍。
关键词： 肠道集聚性大肠杆菌 基因组脱氧核糖核酸 毒力基因 食品检测
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"鲁保一号"菌株的鉴定和生防增效助剂筛选
《山东农业科学 》 2021
摘要：菟丝子是一类在我国广泛分布的恶性寄生杂草。"鲁保一号"是对菟丝子具有良好防效的生物菌剂。本试验克隆了"鲁保一号"菌株LSU和GAPDH基因,并进行了进化分析。结果显示,"鲁保一号"菌株为尖孢炭疽菌菟丝子专化型,能够通过菟丝子茎和吸器部位完成侵入,并形成深褐色病斑。安全性研究显示,该菌株对玉米和小麦等作物安全性较好。孢子萌发筛选试验显示,绝大多数所测助剂对该菌孢子的萌发没有影响;防效研究显示,两种助剂对"鲁保一号"菌株致病力有一定的增效作用。
关键词： 鲁保一号 进化分析 尖孢炭疽菌菟丝子专化型 致病力 农药助剂
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山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析
《中国畜牧兽医 》 2021 北大核心
摘要：试验旨在了解山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的污染状况及耐药情况。选择山东省3个地区的规模化奶牛场共采集227份牛奶样品,采用细菌学方法对大肠杆菌进行分离鉴定,用微量肉汤稀释法检测分离菌对11种常规抗菌药物的敏感性,采用PCR方法对常见的13种耐药基因、8种毒力基因和Ⅰ类整合子基因盒结构进行分析。结果显示,从227份牛奶样品中共分离出71株大肠杆菌;大肠杆菌对1种及1种以上抗菌药耐药的菌株达到77.5%,多重耐药率为15.5%,其中对多黏菌素耐药率为52.2%,对阿莫西林-克拉维酸耐药率为39.4%,而所有菌株均对新霉素表现为敏感。PCR检测耐药基因、毒力基因和Ⅰ类整合子结果显示,β-内酰胺类耐药基因中blaTEM基因携带率为100%,其中全部为blaTEM-1基因,blaCTX-M基因携带率为32.4%,其中主要为blaCTX-M-15基因,没有检测到blaSHV、blaOXA基因;多黏菌素的耐药基因mcr-1携带率为29.6%;喹诺酮类耐药基因中aac（6’）-Ⅰb-cr基因携带率为29.6%,qnrB基因携带率为20.8%,没有检测到qnrA和qnrC耐药基因;对8种毒力基因检测分析结果显示,仅Hly毒力基因没有被检出,Ecs3703、Irp2基因的检出率较高,分别为90.1%和63.4%,71株大肠杆菌中共有11株携带Ⅰ类整合子,检出率为15.5%,11株大肠杆菌携带6种耐药基因盒结构,最主要的耐药基因盒排列为dfr17-aadA5。本研究结果表明,山东地区乳房炎牛奶中大肠杆菌的耐药现象严重,携带毒力基因Ecs3703、Irp2的大肠杆菌可能是引起奶牛乳房炎的致病菌,Ⅰ类整合子的检测在细菌耐药性与基因携带率方面发挥着关键作用,可为临床预防和治疗奶牛乳房炎大肠杆菌病提供理论依据。
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