科研产出
鸡传染性支气管炎弱毒疫苗株安全性和免疫效力初步评价
《中国兽医学报 》 2015 北大核心 CSCD
摘要：通过对QX基因型IBV分离株SDZB0808进行鸡胚连续100次传代致弱后获得子代病毒P100。为了明确P100的的致弱效果和免疫原性,对其进行了安全性和免疫效力评价。安全性试验结果显示,P100以105.5 EID50/只的剂量对3日龄的SPF鸡进行免疫后试验,与正常对照组相比没有明显临床症状和病理变化,气管和肾脏组织也没有病理组织损伤。免疫效力试验结果发现,P100以104.5 EID50/只的剂量免疫3日龄SPF鸡,14d后对同源强毒SDZB0808和异源强毒SDIB821/2012的攻击都具有100%的临床保护,病理组织学检查发现P100免疫攻毒组试验鸡气管和肾脏与正常对照没有差异,排毒检测结果显示P100免疫攻毒组试验鸡内脏组织病毒检出率大大低于攻毒对照组。本研究结果表明P100对SPF鸡具有良好的安全性和免疫效力,可以作为IBV弱毒疫苗候选株。
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1株鸡传染性支气管炎病毒变异株的分子特征和抗原性分析
《中国兽医学报 》 2013 北大核心 CSCD
摘要：从山东省发病商品鸡群分离鉴定了1株鸡传染性支气管炎病毒,命名为CK/CH/SD09/005。S1基因序列分析发现,该株和同期分离的16个IBV流行株与疫苗株H120和491同源性分别为65.2%和66.0%。BLAST发现,CK/CH/SD09/005株仅与GenBank中3个广东分离株同源性较高(98.6%～98.8%),并形成独立的进化群。分别以H120和491为参考株,除了广泛的点突变,CK/CH/SD09/005S1基因在多个位点发生了插入和缺失,CK/CH/SD09/005N基因仅发生了点突变,没有基因插入和缺失;M基因除了发生点突变之外,分别在16～18和7～18位发生了碱基插入。鸡胚中和试验结果显示,CK/CH/SD09/005与H120和491均有交叉中和性,抗原相关性分别为0.18和0.09,应属于Mass和793/B之外新的血清型。结果表明,IBV S1基因可同时通过点突变、插入和缺失产生变异株,增加了免疫预防的难度。
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重组金黄色葡萄球菌FnbpA亚单位疫苗的研制
《西北农林科技大学学报(自然科学版) 》 2011 北大核心 CSCD
摘要：【目的】制备金黄色葡萄球菌纤连蛋白结合蛋白A(FnbpA)基因工程亚单位疫苗,并以小白鼠为试验模型,检测其免疫保护效果。【方法】诱导表达FnbpA,经组氨酸标签亲合纯化后用Bradford法测定纯化的目的蛋白的含量,并检测其黏附活性及对动物的安全性。制备FnbpA亚单位疫苗,经无菌检验及安全检验后,进行免疫保护试验,用ELISA方法检测被免疫小鼠血清中的抗体效价,通过腹腔攻毒试验检测疫苗的免疫保护力。【结果】纯化的目的蛋白在80 ku处出现单一条带,蛋白质量浓度为0.245 mg/mL。细菌黏附抑制试验发现,经FnbpA蛋白预处理过的MDBK细胞黏附的金黄色葡萄球菌数较对照极显著减少;动物安全性试验显示,小鼠注射FnbpA亚单位疫苗后均健活,表明制备的FnbpA亚单位疫苗安全性良好。所有免疫组小鼠于首免后7 d即可在血清中检测到特异性抗体,抗体效价逐渐上升,在21 d达到最高值,之后逐渐降低。【结论】纯化的FnbpA蛋白达到了电泳级纯度,且依然保持良好的黏附活性;制备的FnbpA亚单位疫苗作用机体产生的抗体水平符合抗体消长规律,且表现出良好的免疫保护力。
关键词： 基因工程亚单位疫苗 金黄色葡萄球菌FnbpA 免疫效力 小白鼠
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牛轮状病毒VP4基因与LTB基因的融合表达及免疫原性研究
《西南农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：PCR扩增轮状病毒VP4基因和大肠杆菌LTB基因编码区,将其克隆至pET32a载体上,构建pET32a-VP4-LTB质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),PCR、酶切鉴定后进一步测序,测序结果表明融合基因片段由2637 bp组成,为编码879个氨基酸残基的多肽。经IPTG诱导和SDS-PAGE检测发现表达产物分子量约为118.9 KD,以包涵体的形式存在。融合蛋白经镍离子螯合次氨基三乙酸(Ni-NTA)亲和层析纯化后免疫小鼠,结果所产生的抗体效价高于单独VP4蛋白的免疫结果但差异不显著(P>0.5),但与对照组相比差异显著。表明所表达的融合蛋白具有较好的免疫原性,为研制牛轮状病毒亚单位疫苗奠定了基础。
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鸡传染性支气管炎病毒S1基因在毕赤酵母中的表达及其免疫学原性分析
《浙江农业学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：根据对山东IBV流行株的遗传变异分析,选取流行代表株LC2,扩增其S1基因,将其S1基因克隆到pPIC9K载体中,构建了真核表达质粒pPIC9K-S1,经SacⅠ线性化后,通过电转化到毕赤酵母GS115中,经MD/MM及G418筛选,PCR鉴定,获得多拷贝阳性重组菌pPIC9K-S1-GS115。将重组菌在0.5%甲醇中进行诱导分泌表达,对表达产物进行SDS-PAGE,Western blot分析。结果显示,在酵母培养基上清中检测到分子量为90 ku为目的蛋白,与鸡IBV阳性血清发生特异性反应。将表达上清及其重组菌菌体饲喂SPF鸡,40 d后采血,可检测到IBV保护性抗体。结果表明:表达的IBV的S1蛋白具有很好的免疫原性,为ELISA诊断试剂盒的研制及IBV疫苗的研制奠定基础。
关键词： 鸡传染性支气管炎病毒 S1基因 毕赤酵母 表达 免疫原性
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金黄色葡萄球菌α-溶血素亚单位疫苗在小白鼠模型的免疫效力评价
《中国生物工程杂志 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：目的:以小白鼠为试验模型,检测金黄色葡萄球菌α-溶血素基因工程蛋白单位疫苗的抗体效价水平和免疫保护力,初步评价此亚单位疫苗的免疫效力。方法:Bradfrod法对目的蛋白进行蛋白含量测定,Geoffroy法测定目的蛋白半数溶血效价和活性,建立ELISA方法测定抗体效价,并且通过攻毒得出疫苗免疫保护力。结果:纯化的目的蛋白在53kDa处显示单一条带,蛋白含量为0.1278mg/ml;溶血比活为8012.5HU/mg;所有试验小鼠在首免一周后采集的血清中都检测到了特异性抗体,而抗体效价开始时呈逐渐上升趋势,达最高值后随时间延长逐渐降低。结论:纯化的目的蛋白达到电泳级纯度,且依然保持良好的黏附活性,蛋白疫苗作用机体产生的抗体水平符合抗体消长规律。
关键词： 金黄色葡萄球菌α-溶血素 基因工程亚单位疫苗 免疫效力
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鸡传染性支气管炎病毒呼吸型和肾型毒株的血清交叉中和试验
《畜牧与兽医 》 2008 北大核心
摘要：利用SPF鸡制备了肾型传染性支气管炎山东分离株(KIBV-SD)和呼吸型传染性支气管炎M41株的单因子血清,进行了肾型传支(KIBV-SD)与呼吸型传支(M41)血清交叉中和试验,计算肾型和呼吸型传支病毒抗原性的相关系数(R)。结果表明:KIB-SD单因子血清与其自身病毒进行中和试验,测得血清中和抗体几何平均效价值为23.56;KIB-SD单因子血清与M41V进行中和试验,测得血清中和抗体几何平均效价值为3.56;M41单因子血清与其自身病毒进行中和试验,测得血清中和抗体几何平均效价值为24.51;M41单因子血清与KIBV-SD进行中和试验,测得血清中和抗体几何平均效价值为6.07。经免疫学方法计算,2个毒株间抗原性相关系数R=19.34%(<25%),说明KIBV-SD和M41分别属于不同的血清型,二者之间的抗原性交叉较低。
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