科研产出
牛TARDBP基因核心启动子鉴定与转录调控分析
《生物技术通报 》 2024 北大核心 CSCD
摘要：【目的】为了解牛TARDBP基因结构、功能及启动子活性区域，分析该基因的转录调控机制。【方法】通过PCR技术克隆牛TARDBP基因编码区全长序列。应用生物信息学软件对牛TARDBP蛋白性质和结构进行分析。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术检测TARDBP基因在泌乳期荷斯坦奶牛不同组织中的表达情况。应用5’RACE技术确定牛TARDBP基因的转录起始位点，PCR技术克隆牛TARDBP基因启动子区和5’端系列缺失片段，并运用生物信息学软件对牛TARDBP基因启动子区域CpG岛和潜在转录因子结合位点进行预测，双荧光素酶报告系统确定该基因的核心启动子区域。【结果】牛TARDBP基因在包括乳腺在内的多个组织中均有表达。TARDBP蛋白是一种水溶性非分泌蛋白，存在RNA识别结构域和DNA结合位点。TARDBP基因启动子区存在2个CpG岛和大量转录因子结合位点包括SP1、PPARA、PPARD、PPARG、SREBF1等。双荧光素酶活性分析结果显示牛TARDBP的核心启动子区位于-476--149之间，该区域包含Sp1、PPARG、PPARD、SREBF1结合元件，但不存在TATA-box。【结论】牛TARDBP基因在奶牛多个组织中均有表达。-476--149片段为牛TARDBP基因的核心启动子区，且该区域中存在与乳脂合成和分泌相关的转录因子结合位点。
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基于ddPCR检测荷斯坦牛自由马丁现象的研究
《黑龙江动物繁殖 》 2022
摘要：为了鉴定异性双胎牛性器官发育紊乱疾病——牛自由马丁(freemartinism)综合征,试验选择7头中国荷斯坦异性孪生双胎的母牛进行微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测,并根据异性孪生母犊不孕的个体染色体为XX/XY嵌合、正常母牛染色体为XX来判定是否为嵌合体.结果表明:此7个样本均存在XX/XY染色体嵌合,均为异性孪生不孕母犊.说明ddPCR方法用于鉴定牛自由马丁现象是有效的.
关键词： 荷斯坦牛 自由马丁 微滴数字PCR(ddPCR) 外周血 嵌合体
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荷斯坦牛的牛奶脂肪酸影响因素分析及遗传参数估计
《中国畜牧杂志 》 2021 北大核心
摘要：本研究旨在对荷斯坦牛的牛奶脂肪酸指标表型以及遗传规律进行挖掘,为该性状的选择提供理论基础。本实验收集2019年12月到2020年7月山东及周边地区49个牧场30 016头健康荷斯坦牛的53 172条测定日记录,包含饱和脂肪酸（Saturated Fatty Acid,SFA）、不饱和脂肪酸（Unsaturated Fatty Acid,UFA）、单不饱和脂肪酸（Monounsaturated Fatty Acid,MUFA）、多不饱和脂肪酸（Polyunsaturated Fatty Acid,PUFA）、棕榈酸C16:0（Palmitic Acid,PA）、硬脂酸C18:0（Stearic Acid,SA）、油酸C18:1 cis-9（Oleic Acid,OA）7种脂肪酸的预测表型信息,利用SAS的GLM过程进行多因素方差分析,探究对脂肪酸含量存在显著影响的环境因素;使用DMU软件估计各脂肪酸的遗传力及其之间的表型相关和遗传相关。结果显示,场年月、泌乳阶段、产犊月份、体细胞评分对各脂肪酸均存在极显著影响（P<0.01）,而胎次只对MUFA、OA、PUFA存在显著影响;各脂肪酸估计遗传力在0.04～0.10之间、估计重复力为中低水平（0.16～0.26）;各脂肪酸之间均呈正的中高遗传相关（0.32～0.97）;各脂肪酸之间表型相关范围为0.44～0.99,和遗传相关方向一致且多数性状间表型相关大于遗传相关。本研究结果显示牛奶脂肪酸比例存在遗传变异,说明荷斯坦牛脂肪酸性状有望通过选择进行遗传改良,获得的遗传参数为牛奶脂肪酸的选择提供了参考。
关键词： 荷斯坦牛 牛奶脂肪酸 FT-MIR 遗传力 遗传相关
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中国荷斯坦牛HSP70基因3＇-非翻译区多态性与耐热性的关联分析
《华北农学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：用PCR-SSCP和测序技术研究了541头中国荷斯坦奶牛热休克蛋白70(HSP70)基因的3'-非翻译区的多态性,并研究了多态性对奶牛产奶性状和耐热性状的影响。设计引物扩增片段大小549 bp,通过PCR-SSCP技术发现参与试验的奶牛出现了3个复等位基因:A、B和C,6种基因型:AA、AB、AC、BB、BC和CC基因型。测序发现复等位基因是由3个新的突变引起的,第6 400、6 600和6 601位碱基分别发生了G/C、C/T和G/A突变。χ2适合性检验表明,该群体在这三个位点的突变没有达到Hardy-Weinberg平衡状态(P<0.01)。中国荷斯坦牛BB基因型个体红细胞钾含量和产奶量下降率显著低于其他基因型个体(P<0.05),表明BB型的中国荷斯坦牛耐热性能优于其他类型。BB基因型个体305 d产奶量高于其他5种基因型的个体,进一步说明BB基因型可能在选育高产抗热应激奶牛中得到应用。
关键词： 荷斯坦奶牛 HSP70基因 多态性 热应激 PCR-SSCP
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荷斯坦奶牛热休克蛋白70基因3'-侧翼区遗传变异与耐热性的关系
《农业生物技术学报 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：本实验采用PCR-SSCP和测序技术对荷斯坦奶牛和鲁西黄牛两个群体共673个个体热休克蛋白70基因(HSP70)的3'-侧翼区的遗传变异,及该突变对奶牛产奶性状和耐热性状的影响进行研究。研究结果表明设计引物扩增片段大小500bp,扩增产物具有多态性。供试的72头鲁西黄牛和601头荷斯坦奶牛均发现3种基因型,为AA、AB和BB型。测序分析发现热休克蛋白70基因(HSP70)的3'-侧翼区存在1个新突变,T→C。关联分析结果表明,BB基因型荷斯坦奶牛个体,乳脂率、乳蛋白率和305d产奶量,相对于AA基因型的个体都要高;红细胞钾含量和产奶量下降率比AA类型个体要低,且达显著水平(P<0.05)。鲁西黄牛B基因基因频率为74.31%,而荷斯坦奶牛B基因基因频率却比较低,为14.89%。由于鲁西黄牛耐热性显著强于荷斯坦奶牛,且耐热性最高的BB型奶牛产奶量下降率显著低于耐热性差的AA型奶牛。等位基因B可作为选育抗热应激奶牛潜在的分子遗传标记。
关键词： 荷斯坦奶牛 热休克蛋白70基因(HSP70) 多态性 热应激
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荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因克隆、原核表达及其抗菌活性分析
《中国农业科学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：【目的】实现荷斯坦牛中性粒细胞防御素BNBD12基因在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组BNBD12的抗菌活性。【方法】RT-PCR扩增荷斯坦牛中性粒细胞BNBD12基因,序列分析后人工合成了适于在大肠杆菌中表达的BNBD12成熟肽,构建原核表达载体pET32a(+)/BNBD12,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过琼脂扩散法分别确定重组蛋白对牛源乳腺炎主要致病菌革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的抗菌效果,应用扫描电镜观察重组蛋白的杀菌效应。【结果】测序结果表明扩增片段长度为180bp,可编码含60个氨基酸的成熟蛋白。SDS-PAGE和Western blotting分析显示人工合成的BNBD12的成熟肽基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的21.4%;纯化的重组蛋白0.05mg·mL-1对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌有明显抑菌效果;扫描电镜观察发现重组蛋白作用后可引起病原菌内容物外泄而死亡。【结论】成功表达了荷斯坦牛中性粒细胞β-防御素12,该重组蛋白既可作用于革兰氏阳性菌又可作用于革兰氏阴性菌,显示出较好的临床应用前景。
关键词： β-防御素12(BNBD12) 荷斯坦牛 表达 抗菌活性 乳腺炎
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hsp70基因编码区一新SNP的发现及其多态性与热应激性状的相关性研究(英文)
《中国农业科技导报 》 2009
摘要：为了探索hsp70基因多态性与热应激性状(直肠温度和红细胞钾含量)的相关性,利用PCR-SSCP方法检测290头中国荷斯坦奶牛hsp70基因的未知SNP,并利用PCR-RFLP方法对基因进行分型,采用SBYE荧光定量PCR方法检测不同组织中hsp70mRNA表达水平。结果显示,在1524位点发现一个G/A突变,有两种基因型(AA/AB),基因频率和基因型频率分别是0.9570,0.0430和0.9137,0.0863,卡方检验该群体处于哈迪-温伯格平衡。相关性分析结果表明,AA、AB基因型的直肠温度没有显著差异,但在红细胞钾含量中有极显著差异。肝脏中hsp70mRNA表达水平显著高于其他组织。推测hsp70基因1524位点的G/A SNP与中国荷斯坦奶牛热应激有关。
关键词： 热休克蛋白70 多态性 热应激 荧光定量PCR 荷斯坦奶牛
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荷斯坦牛红细胞Na~+-K~+-ATP酶的研究进展
《中国畜牧兽医 》 2009 北大核心
摘要：作者对荷斯坦牛红细胞Na+-K+-ATP酶的分子结构和基本特征、分布、作用机制、调控机制、生理功能、影响因素及其与热应激的关系进行了综述。
关键词： 荷斯坦牛 Na+-K+-ATP酶 热应激
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荷斯坦牛κ-酪蛋白基因两SNPs位点基因型组合对产奶性状的影响
《农业生物技术学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：采用PCR-RFLP、CRS-PCR和DNA测序技术,对435头荷斯坦牛的κ-酪蛋白基因的外显子4和5上2个单核苷酸多态性(SNP)位点进行了研究。结果发现,在435头牛群中,共有8种基因型组合。单个SNP位点关联分析表明:T10996A突变位点3种基因型间TA基因型个体乳脂率极显著高于AA基因型个体(P<0.01),TA基因型个体乳蛋白率显著高于AA基因型个体(P<0.05)。T12980C突变位点的3种基因型间TC基因型个体乳脂率极显著高于TT基因型个体(P<0.01),TC和CC基因型个体乳蛋白率显著高于TT基因型个体(P<0.05)。T10996A/T12980C两种基因型组合分析中,在乳脂率上,TTCC基因型组合个体最高,TATC基因型组合个体位居第三位;在乳蛋白率上,TATC基因型组合个体显著高于AATT基因型组合个体(P<0.05)。κ-酪蛋白基因不同基因型和基因型组合与荷斯坦牛乳脂率和乳蛋白率存在相关性,但与产奶量和脂蛋白比不相关。
关键词： 荷斯坦牛 κ-酪蛋白基因 多态性 产奶性状 基因型组合
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不同水平维生素A对荷斯坦种公牛血清指标的影响
《畜牧与兽医 》 2008 北大核心
摘要：试验旨在研究不同水平维生素A对荷斯坦种公牛血清维生素A和抗氧化指标的影响。试验选取20头荷斯坦种公牛,随机分为4组,单因子饲养试验设计,分别饲喂不同水平维生素A的日粮,维生素A的添加水平分别为0、10 000 U/kg、20 000 U/kg、40 000 U/kg(按日粮干物质计),试验期为8个月。结果表明:不同水平维生素A对荷斯坦种公牛血清中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和总抗氧化能力(T-AOC)活性影响极显著(P<0.01),对血清一氧化氮(NO)差异显著(P<0.05),对血清过氧化氢酶(CAT)活性无显著影响(P>0.05)。综合分析不同维生素A水平下试验牛抗氧化指标的变化表明:维生素A的适宜添加量为20 000 U/kg日粮干物质。
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