科研产出
非洲猪瘟病毒UBCv1的原核表达及多抗制备
《北京农学院学报 》 2021
摘要：【目的】为研究非洲猪瘟病毒（ASFV）泛素结合酶（UBCv1）的生物学功能及致病机制奠定基础。【方法】以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,并将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白。重组蛋白经His柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】成功构建了重组质粒pET-28a-I215L,重组菌经IPTG诱导后能够可溶性表达重组蛋白,产物约28 kDa,与预测大小一致。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶7 290 000;Western blot结果显示抗体具有较好的特异性。【结论】成功表达纯化了ASFV的泛素结合酶并制备其多克隆抗体,为后期解析ASFV泛素结合酶的结构、功能及病毒相关致病机制提供了重要的生物材料。
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一种新的植物泛素结合酶体外泛素化检测方法
《山东农业科学 》 2018
摘要：泛素结合酶是一类在泛素化修饰过程中起重要生物化学功能的蛋白。对于被预测为泛素结合酶的蛋白进行体外泛素化活性检测,是确定其泛素结合酶功能必不可少的试验步骤,试验结果可以为后续研究提供重要的线索。目前体外泛素化反应存在体外表达纯化蛋白工作量大、反应复杂、假阴性率高等问题。本研究针对以上问题进行了改良,开发出一种新的植物泛素结合酶活性体外检测方法,该方法无需裂解细胞提取、纯化蛋白,也不需要做体外反应,简便易行,结果更稳定可靠。应用该方法对花生泛素结合酶Ah UBC34和盐芥泛素结合酶Ts UBC33进行了检测,结果证明这两个蛋白都具有泛素结合酶活性。
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