文献类型： 中文期刊

作者： 蒋思文 ¹ ; 房立春 ² ; 冯泽新 ¹ ; 焦鹏 ¹ ; 王玥超 ¹ ; 梁艳 ¹ ; 史东宇 ¹ ; 陈青 ¹ ;

作者机构： 1.北京农学院生物与资源环境学院/农业农村部华北都市农业重点实验室

2.山东省农业科学院

关键词： 非洲猪瘟病毒;泛素结合酶;原核表达;多克隆抗体

期刊名称： 北京农学院学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 004 期

页码： 1-6

摘要： 【目的】为研究非洲猪瘟病毒（ASFV）泛素结合酶（UBCv1）的生物学功能及致病机制奠定基础。【方法】以p3XFLAG-CMV-7.1-I215L质粒为模板,利用PCR方法扩增非洲猪瘟病毒I215L基因,将其克隆至原核表达载体pET-28a,构建pET-28a-I215L重组质粒,并将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导表达重组蛋白。重组蛋白经His柱层析纯化后免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,采用ELISA方法检测抗体效价,Western blot检测抗体特异性。【结果】成功构建了重组质粒pET-28a-I215L,重组菌经IPTG诱导后能够可溶性表达重组蛋白,产物约28 kDa,与预测大小一致。用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA测定抗体效价为1∶7 290 000;Western blot结果显示抗体具有较好的特异性。【结论】成功表达纯化了ASFV的泛素结合酶并制备其多克隆抗体,为后期解析ASFV泛素结合酶的结构、功能及病毒相关致病机制提供了重要的生物材料。