科研产出
水稻ERECTA基因组DNA的克隆及植物表达载体构建
《山东农业科学 》 2013
摘要：根据水稻ERECTA的cDNA序列(GenBank中的登陆号:Os06g0203800),利用NCBI的Blast工具找到OsERECTA所对应的基因组DNA序列(gERECTA),根据该序列设计2对特异引物,对gERECTA进行分段PCR扩增,并对前后两部分片段进行克隆、测序和拼接。本研究得到的gERECTA序列为8 901 bp,其中包括约1.7 kb的5'区域和约300 bp的3'区域。将拼接起来的gERECTA序列插入到pCAMBIA1390载体,经酶切和测序鉴定,证明重组表达质粒中带有gERECTA基因片段,表明gERECTA植物表达载体pCAMBIA1390-gERECTA已成功构建。
关键词： 水稻 OsERECTA基因 克隆 植物表达载体
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大白菜抗软腐病基因BrWRKY33植物表达载体的构建
《基因组学与应用生物学 》 2010 北大核心 CSCD
摘要：利用农杆菌侵染法获得抗软腐病转BrWRKY33基因大白菜,首先要构建植物表达载体。本实验根据BrWRKY33基因的序列及pROK2表达载体的酶切位点设计引物(FN/RN),获得BrWRKY33基因,然后将该基因连接到克隆载体pGEM-TEasy,重新构建了克隆载体T-WRKY。经测序及酶切验证,选取PCR反应中错配率最低的产物,构建了表达载体pROK2-WRKY,并将该表达载体转入到根癌农杆菌EHA105中,并对其转化子进行了鉴定。结果表明,PCR扩增获得目的基因BrWRKY33全长约1443bp,PCR及酶切结果鉴定表明克隆载体T-WRKY已经重新构建成功。表达载体的PCR及BamHⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定表明有4个重组子表现阳性,表明目的基因已经插入到pROK2表达载体,表达载体构建成功。PCR鉴定表明表达载体pROK2-WRKY已经转入根癌农杆菌EHA105中。本实验结果将为进一步研究大白菜抗软腐病基因的转化奠定基础。
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油体蛋白与人成骨蛋白-1基因融合植物表达载体的构建及融合蛋白性质预测
《西南农业学报 》 2009 北大核心 CSCD
摘要：克隆大豆油体蛋白特异启动子及油体蛋白基因的全长序列,利用连接PCR的方法,通过一个肠肽酶位点将人成骨蛋白成熟肽编码序列连接到油体蛋白基因3’端并克隆到表达载体pCAMB IA1302中,构建"油体蛋白-肠肽酶-人成骨蛋白"植物表达载体。通过酶切、PCR和测序鉴定,证明表达载体构建成功,将其命名为pCAM-oleo-Bmp7。通过蛋白分析软件DNAstar、S ignalP3.0和ProtComp v8.0等软件对重组蛋白的理化性质、二级结构、信号肽和细胞定位进行了分析和预测,证明融合蛋白很好的保留了原来两个蛋白的二级结构和理化性质。
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